HPS血清型4、13型TbpA對(duì)豚鼠的交互免疫保護(hù)性研究.pdf

1、副豬嗜血桿菌（Haemophilus parasuis，HPS）在特定條件下可致豬，特別是斷奶仔豬和保育豬發(fā)生以多發(fā)性漿膜炎、關(guān)節(jié)炎、腦膜炎為主要特征的副豬嗜血桿菌病，藥物防治、疫苗接種等是常用的防治該病的方法。然而，各類(lèi)抗生素不合理的長(zhǎng)期使用致使HPS的耐藥性日益增強(qiáng);同時(shí)由于HPS血清型復(fù)雜，相互間缺乏交互免疫性，且具有明顯的地方特征，目前僅有的一些商品化滅活疫苗很少或不能產(chǎn)生交叉保護(hù)。因此研制具有良好免疫性，尤其是能誘導(dǎo)產(chǎn)生交互免

2、疫保護(hù)力的新型疫苗具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。
　　本實(shí)驗(yàn)室前期的研究結(jié)果顯示，HPS血清型13型轉(zhuǎn)鐵結(jié)合蛋白A(TbpA)不僅對(duì)于相同血清型菌株攻毒的豚鼠具有良好的免疫活性，還可以對(duì)不同血清型菌株（血清型4型）提供一定的交叉保護(hù)力，但其他血清型HPS的TbpA能否針對(duì)不同血清型提供交互免疫保護(hù)尚不明確。本研究系在前期研究的基礎(chǔ)上，利用表達(dá)的HPS血清型4、13型重組TbpA免疫豚鼠，通過(guò)檢測(cè)免疫后豚鼠血清中抗體水平和細(xì)胞因子（腫瘤壞死因

3、子TNF-α，干擾素IFN-γ，白細(xì)胞介素IL-2、IL-5、IL-8，趨化因子MCP-1）水平，觀察攻毒后豚鼠的采食量、精神狀態(tài)及死亡率，剖檢病變及其病理組織學(xué)變化，探究HPS不同血清型的TbpA對(duì)豚鼠的交互免疫保護(hù)作用，從而為后期在本動(dòng)物（仔豬）上進(jìn)一步開(kāi)展相關(guān)研究奠定基礎(chǔ)。
　　首先，Reed-Muench（累積法）測(cè)定HPS血清型4、13型對(duì)HPS抗體陰性豚鼠的半數(shù)致死量(LD50)。其次，篩選54只健康的40日齡HPS抗

4、體陰性雌性豚鼠，每組隨機(jī)分配6只，共9組;A1、A2組以100μg/只免疫HPS血清型4型TbpA;B1、B2組以100μg/只免疫HPS血清型13型TbpA;C1、C2組以200μL/只注射PBS作為攻毒對(duì)照組;A3、B3、C3組以200μL/只注射PBS作為空白對(duì)照。采用弗氏佐劑，背部皮下多點(diǎn)注射，免疫兩次，每次免疫劑量相同，間隔時(shí)間20天。每次免疫后10天心臟采血分離血清，檢測(cè)血清中抗體和細(xì)胞因子(IL-2、IL-5、IL-8、I

5、FN-γ、TNF-α、MCP-1)含量。在第2次免疫后21天，A1、B1、C1以HPS血清型4型1×LD100劑量進(jìn)行攻毒，A2、B2、C2以HPS血清型13型1×LD100劑量進(jìn)行攻毒，A1、B1、C1注射等量PBS，統(tǒng)計(jì)免疫保護(hù)率，剖檢豚鼠，制作病理組織切片觀察比較病理變化。
　　結(jié)果顯示，豚鼠在免疫HPS血清型4、13型TbpA后，血清中抗體水平均有所升高，二免后均上升顯著，但兩者之間差異不顯著;除MCP-1外，5種細(xì)胞因子

6、水平在兩次免疫后均顯著上升，且兩次免疫之間差異顯著，但免疫血清型4和13型TbpA組之間差異不顯著;血清型4型TbpA免疫組對(duì)同血清型和不同血清型HPS的攻毒保護(hù)率為66.7％和50％;血清型13型TbpA免疫組對(duì)同血清型和不同血清型HPS的攻毒保護(hù)率為81.3％和50％;免疫攻毒組存活豚鼠和空白對(duì)照組豚鼠均未見(jiàn)明顯肉眼病變和病理組織變化，而死亡豚鼠肺臟出血、壞死，肝臟表面纖維素性滲出，胸腔、腹腔積液，胸腔粘連，腦出血，肺臟、脾臟、肝臟