干擾素-α對(duì)肝星狀細(xì)胞分泌Ⅲ型膠原及PAI-1表達(dá)影響的研究.pdf

1、背景
　　肝硬化是嚴(yán)重威脅人類生命健康的疾病，是各種慢性肝臟疾病的最常見的最終結(jié)果[1]，其基本病理改變是纖維化，肝纖維化是肝臟對(duì)慢性損傷的一種修復(fù)反應(yīng)，其典型特征即細(xì)胞外基質(zhì)(extracellularmatrix，ECM)的過度聚集。既包括ECM生成增多，也包括ECM降解減少[2]。研究發(fā)現(xiàn)肝纖維化的形成主要由于肝星狀細(xì)胞(hepaticstellatecell，HSC)激活增生轉(zhuǎn)化和分裂使大量膠原蛋白多糖和糖蛋白等ECM成分

2、生成過多降解相對(duì)不足在肝內(nèi)沉積所致。HSC的持續(xù)激活是肝纖維化發(fā)生發(fā)展過程中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)[3]。各種致肝纖維化的損傷因子激活HSC轉(zhuǎn)變?yōu)榧〕衫w維細(xì)胞，通過自分泌和旁分泌作用促進(jìn)HSC增殖，并分泌大量的ECM。
　　肝星狀細(xì)胞的活化及細(xì)胞外基質(zhì)合成與降解的不平衡是肝纖維化形成的關(guān)鍵?；罨腍SC能大量表達(dá)PAI-1，PAI-1是生理上專一抑制纖溶酶原激活的抑制劑，它可通過與尿激酶型纖溶酶原激活物(uPA)以1∶1比例形成復(fù)合物，阻止其

3、激活纖溶酶原，降低基質(zhì)金屬蛋白酶(matrixmetalloproteinase，MMP)活性，導(dǎo)致ECM過多沉積。轉(zhuǎn)化生長因子β1(transforminggrowthfactor-β1，TGF-β1)是ECM的主要組成成分，TGFβ1可促進(jìn)HSCPAI-1的表達(dá)，同時(shí)在肝病后期，玻璃體結(jié)合蛋白減少，隨之PAI-1活性下降。纖溶酶增加，激活潛在TGFβ1，發(fā)揮促進(jìn)ECM合成等生物學(xué)作用，促進(jìn)肝纖維化形成。
　　PAI-1，一個(gè)T

4、GFβ的下游效應(yīng)信號(hào)，可能成為一個(gè)關(guān)鍵因素[4,5]。細(xì)胞外基質(zhì)蛋白沉積不僅是由蛋白合成增加造成的，也與蛋白減少密不可分。現(xiàn)有研究表明，肝纖維化是一個(gè)改變ECM降解的過程，同時(shí)PAI-1與此過程密切相關(guān)[4,5]。Gavin等[6]研究表明，PAI-1升高與TGFβ依賴的肝纖維化進(jìn)展抑制。這一研究成果也得到其他研究學(xué)者的證實(shí)。PAI-1蛋白的減少，伴隨著TGFβ1轉(zhuǎn)錄的減弱，可能提示一種關(guān)于TGFβ1/Smad信號(hào)軸的抑制作用，大概與降

5、低Smad2/3磷酸化有關(guān)[7]。
　　肝纖維化的形成原因可能為損傷因子刺激導(dǎo)致枯否細(xì)胞等分泌一系列細(xì)胞因子，引起TGFβ1的分泌增加，激活HSC產(chǎn)生ECM，損傷長期存在導(dǎo)致ECM降解與合成的酶類及細(xì)胞因子分泌不平衡，最終形成肝纖維化。肝纖維化的形成是多種復(fù)雜因子交叉影響的結(jié)果，IFN-α對(duì)肝星狀細(xì)胞分泌Ⅲ型膠原的影響及PAI-1在此治療過程中的作用有待進(jìn)一步研究。
　　為此我們?cè)O(shè)計(jì)了以下實(shí)驗(yàn):
　　目的
　　1

6、.觀察IFN-α處理肝星狀細(xì)胞0、24、48、72小時(shí)后，觀察Ⅲ型膠原產(chǎn)生的變化。
　　2.觀察IFN-α處理肝星狀細(xì)胞0、24、48、72小時(shí)后，觀察PAI-1的表達(dá)變化。
　　3.明確PAI-1和肝纖維化的相關(guān)性。
　　方法
　　體外培養(yǎng)HSC-T6細(xì)胞系，為猿猴病毒40轉(zhuǎn)染SD大鼠肝星狀細(xì)胞后生成，其表型為活化的肝星狀細(xì)胞。細(xì)胞增殖活躍期予以IFN-α對(duì)HSC進(jìn)行干預(yù)，IFN-α終濃度為0.1ng/ml，分

7、別在處理0、24、48、72小時(shí)后，收集細(xì)胞，通過Westernblot方法，檢測(cè)Ⅲ型膠原及PAI-1基因表達(dá)的情況。
　　結(jié)果
　　1.IFN-α濃度為0.1ng/ml干預(yù)HSC，HSC分泌的Ⅲ型膠原以時(shí)間依賴方式逐漸減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　2.IFN-α干預(yù)HSC，PAI-1的表達(dá)以時(shí)間以來方式逐漸升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　結(jié)論
　　1.IFN-α以時(shí)間依賴方式