甲殼素載體支架的生物相容性和對(duì)角膜上皮損傷的修復(fù)研究.pdf

1、目的：角膜是眼球的第一道屏障，對(duì)維持視覺(jué)具有極其重要的作用。角膜上皮細(xì)胞的穩(wěn)態(tài)對(duì)于維持眼表完整和視覺(jué)功能具有極其重要的作用，角膜上皮受損會(huì)影響人的正常生活，尤其當(dāng)角膜緣受損嚴(yán)重時(shí)，角膜上皮無(wú)法再生修復(fù)，因此需要選擇合適而有效的方法重建角膜上皮層。目前常用組織工程的方法構(gòu)建角膜上皮層，然而組織工程角膜載體支架材料的應(yīng)用受到柔韌性、降解速率、免疫排斥反應(yīng)等的限制，因此選擇一種安全無(wú)毒性、柔韌性好、降解速率合適、免疫排斥反應(yīng)低且易獲取的材料成

2、為目前組織工程角膜支架材料研究的熱點(diǎn)。甲殼素具有抑菌性、能促進(jìn)細(xì)胞新陳代謝，并能提高機(jī)體免疫力等功效，而且無(wú)毒副作用，無(wú)免疫原性，在生物醫(yī)用材料方面有很多應(yīng)用。
　　方法：本研究以甲殼素為主要材料，主要進(jìn)行了以下實(shí)驗(yàn)研究：
　　1、甲殼素性質(zhì)、甲殼素混合膜制備及理化性質(zhì)測(cè)定：對(duì)甲殼素分子量、脫乙酰度以及紅外結(jié)構(gòu)表征等理化性質(zhì)進(jìn)行測(cè)定；將甲殼素與硫酸軟骨素按一定比例制備甲殼素混合膜，并對(duì)其厚度、含水量、透光率、機(jī)械性能等理化性

3、質(zhì)進(jìn)行測(cè)定；
　　2、甲殼素混合膜生物相容性：將甲殼素混合曲率膜片貼附于新西蘭大白兔眼表，通過(guò)對(duì)其眼部的定時(shí)觀察來(lái)了解共混膜對(duì)兔眼的刺激反應(yīng)；通過(guò)MTT法評(píng)價(jià)甲殼素混合膜的細(xì)胞毒性，并用掃描電鏡觀察細(xì)胞在混合膜上的生長(zhǎng)貼附情況；將混合膜植入大鼠皮下和腿部肌肉觀察其體內(nèi)降解情況和組織相容性。
　　3、載細(xì)胞混合膜對(duì)角膜上皮損傷的修復(fù)作用：將載細(xì)胞甲殼素混合曲率膜移植到受損的兔角膜上皮層表面，定時(shí)進(jìn)行熒光染色觀察其修復(fù)情況，并對(duì)

4、修復(fù)后的角膜上皮層進(jìn)行病理學(xué)和掃描電鏡觀察。
　　結(jié)果：
　　1、本文主要研究材料為脫乙酰度相對(duì)較低的大分子量甲殼素，其脫乙酰度為19.33％，分子量為2×106KD，并確定了甲殼素混合平面膜和曲率膜的制備方法。制備的甲殼素混合膜厚度在0.2mm左右；在400-800nm之間的透光率均大于80%；含水量為81.59%，與人角膜基質(zhì)含水量接近；干態(tài)下拉伸強(qiáng)度達(dá)到14.925 MPa，濕態(tài)下拉伸強(qiáng)度為3.28 MPa，與人眼角膜

5、濕態(tài)抗張強(qiáng)度(4MPa)較為接近。
　　2、甲殼素混合膜對(duì)兔眼無(wú)刺激反應(yīng)，無(wú)細(xì)胞毒性，細(xì)胞相容性好，并能促進(jìn)角膜上皮細(xì)胞在混合膜上的增殖生長(zhǎng)。體內(nèi)降解時(shí)間相對(duì)較慢，皮下為22w，肌肉處為18w，組織相容性好，炎癥反應(yīng)小，說(shuō)明該材料具有良好的生物相容性。
　　3、與對(duì)照組相比載細(xì)胞甲殼素混合膜能加速角膜上皮細(xì)胞的損傷修復(fù)速率，且修復(fù)后的角膜上皮層結(jié)構(gòu)致密整齊。
　　結(jié)論：以甲殼素和硫酸軟骨素為材料制備的組織工程角膜載體支