肝癌的抑癌基因異常甲基化檢測及其臨床意義研究.pdf

1、目的：研究肝癌組織、癌旁組織、正常肝組織中的GSTP1、P16、RIZ1、RASSF1A4種基因啟動子區(qū)域甲基化狀態(tài)的表達(dá)差異，并探討其在肝癌發(fā)生中的作用，以期能篩選出用于肝癌臨床早期診斷的分子生物學(xué)標(biāo)志物。
　　方法：運用甲基化特異性聚合酶鏈反應(yīng)（methylation-specific PCR，MSP）技術(shù)，分別檢測35例肝癌組織及其相應(yīng)的癌旁組織和20例正常對照肝組織中4種候選抑癌基因（GSTP1、P16、RIZ1、RASS

2、F1A）啟動子區(qū)域的甲基化表達(dá)情況，并結(jié)合臨床病理資料（性別、年齡、腫瘤大小、組織病理分化程度、AFP是否陽性，是否存在肝硬化、是否存在包膜侵犯、是否轉(zhuǎn)移等）進(jìn)行分析。
　　結(jié)果：在肝細(xì)胞癌、癌旁及正常對照肝組織中檢測到GSTP1基因啟動子區(qū)的甲基化率分別是57.1%(20/35)，25.7%(9/35)，0%(0/20)；P16基因啟動子區(qū)甲基化率分別是54.3%(19/35)，37.1%(13/35)，0%(0/20)；RIZ

3、1基因啟動子區(qū)甲基化率分別是68.6%(24/35)，14.3%(5/35)，0%(0/20)；RASSF1A基因啟動子區(qū)甲基化率分別是88.6%(31/35)，74.3%(26/35)，10%(2/20)。其中癌組織中GSTP1和RIZ1基因甲基化率均顯著高于相應(yīng)的癌旁組（P＜0.01）和正常對照肝組織（P＜0.01）。而癌組織中p16、RASSF1A啟動子區(qū)甲基化率高于癌旁組織，但二者無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），但明顯高于正常對照

4、肝組織（P＜0.01）。在上述4個肝癌甲基化特異性基因與臨床病理資料的相關(guān)分析中，在肝癌組織中腫瘤有包膜侵犯者GSTP1基因甲基化陽性率明顯高于無包膜侵犯者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；乙肝表面抗原(HbsAg)陽性的肝癌患者P16基因甲基化陽性的比率要顯著高于HbsAg陰性者，二者有統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05）；而RIZ1、RASSF1A與臨床病理資料間均沒有顯著的統(tǒng)計學(xué)相關(guān)意義（P＞0.05）。
　　結(jié)論：1.在肝癌的癌變

5、過程中，腫瘤相關(guān)抑癌基因GSTP1、P16、RIZ1、RASSF1A啟動子區(qū)的甲基化作為常見的表觀遺傳學(xué)改變，不僅發(fā)生在腫瘤形成之后，它還是一個早期頻發(fā)事件，并且在肝細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化過程中逐步積累。
　　2.RIZ1、GSTP1基因甲基化狀態(tài)具有肝癌特異性，可較好的區(qū)分肝癌與非癌，可作為臨床肝癌輔助診斷的候選標(biāo)志物，用以檢測病人患HCC的風(fēng)險。
　　3.慢性HBV感染可能是導(dǎo)致P16甲基化而失活的原因，GSTP1基因啟動子甲基