欖香烯對(duì)肝癌細(xì)胞株中抑癌基因甲基化影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:研究欖香烯對(duì)肝癌細(xì)胞株HepG2和QGY7703細(xì)胞增殖、凋亡、周期的影響,明確欖香烯對(duì)兩種肝癌細(xì)胞抗腫瘤作用;檢測(cè)欖香烯處理前后的兩種細(xì)胞中抑癌基因GSTP1、RIZ1、HAI-2、SLIT2甲基化狀態(tài),探討欖香烯是否具有逆轉(zhuǎn)異常甲基化作用,并以期篩選出具有肝癌特異性的抑癌基因。
　　方法:采用不同濃度的欖香烯處理肝癌細(xì)胞株HepG2和QGY7703細(xì)胞,用MTT法檢測(cè)欖香烯對(duì)兩種細(xì)胞抑制增殖的作用,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)欖香烯誘

2、導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用及對(duì)細(xì)胞周期的影響,用 MSP法檢測(cè)欖香烯對(duì)處理前后的兩種細(xì)胞中抑癌基因GSTP1、RIZ1、HAI-2、SLIT2甲基化的影響。
　　結(jié)果:不同濃度的欖香烯作用肝癌細(xì)胞株HepG2和QGY7703細(xì)胞48h后,顯示出對(duì)兩種肝癌細(xì)胞明顯抑制增殖作用,對(duì)兩種肝癌細(xì)胞的IC50分別為(69±6.3)μg/ml和(63±2.1)μg/ml;與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);兩種肝癌細(xì)胞未經(jīng)欖香烯處理時(shí)自然凋亡

3、率分別為(6.37±0.15)％和(7.40±0.66)％,欖香烯在10、20、30μg/ml濃度下對(duì)兩種肝癌細(xì)胞的凋亡率分別為(20.83±0.25)％和(12.50±0.61)％、(27.7±0.75)％和(32.77±2.30)％、(37.1±0.46)％和(48.27±1.23)％,各組間差異有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);在10、20、30μg/ml濃度下,欖香烯能使兩種肝癌細(xì)胞阻滯于 S期,G1期細(xì)胞百分比分別由(68.7

4、1±0.69)％和(65.56±0.41)％下降到(60.81±0.38)％和(53.00±0.15)％,S期細(xì)胞百分比分別由(28.85±0.18)％和(27.04±0.45)％增加到(36.81±0.36)％和(38.43±0.60)％,與對(duì)照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);GSTP1、RIZ1、HAI-2基因在肝癌細(xì)胞株HepG2和QGY7703兩種細(xì)胞中均呈完全甲基化表達(dá),SLIT2基因呈部分甲基化表達(dá),其中經(jīng)過(guò)濃度4

5、0μg/ml和160μg/ml欖香烯和5-Aza-dc處理,GSTP1基因在QGY7703細(xì)胞中出現(xiàn)了未甲基化狀態(tài)。
　　結(jié)論:
　　1.欖香烯對(duì)肝癌細(xì)胞株HepG2和QGY7703細(xì)胞有明顯的抑制增殖作用,誘導(dǎo)其凋亡,并且阻滯兩種肝癌細(xì)胞從S期進(jìn)入G2/M期,呈濃度依賴性。
　　2.欖香烯具有逆轉(zhuǎn)抑癌基因異常甲基化作用,但具有基因和細(xì)胞特異性。
　　3. GSTP1、RIZ1、HAI-2基因甲基化狀態(tài)具有很好的