Wntβ-catenin、Wnt10b在骨痂中的表達(dá)變化和2型糖尿病骨折愈合障礙的關(guān)系.pdf

1、目的:建立2型糖尿病大鼠動(dòng)物骨折牽引模型，探討骨痂中Wntβ-catenin、Wnt10b的表達(dá)變化與2型糖尿病骨折愈合障礙的關(guān)系。
　　方法:將30只6周齡健康雄性SD大鼠，按隨機(jī)數(shù)字表法分為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組各15只，實(shí)驗(yàn)組喂以改良后的高糖高脂飼料，對(duì)照組喂以普通大鼠飼料。喂養(yǎng)8周后，實(shí)驗(yàn)組一次性腹腔注射小劑量STZ(30mg/kg)，對(duì)照組腹腔注射等量枸櫞酸鹽緩沖液。以同上方法喂養(yǎng)2周后，選取空腹血糖高于16.7mmol/L者選

2、入實(shí)驗(yàn)組繼續(xù)實(shí)驗(yàn)，2組大鼠一同建立左側(cè)脛骨骨折牽引成骨模型，術(shù)后第二天開始延長(zhǎng)脛骨，持續(xù)至術(shù)后第十四天，以0.15mm/次，2次/天的方法持續(xù)延長(zhǎng)脛骨，術(shù)后第15天停止延長(zhǎng)收集血液標(biāo)本后處死大鼠，無菌條件下收集左側(cè)脛骨標(biāo)本，迅速行左側(cè)脛骨X線攝片檢查。檢測(cè)實(shí)驗(yàn)第8、10周及處死動(dòng)物前血清標(biāo)本中的三酰甘油(TG)、總膽固醇(TC)、胰島素(FINs)、空腹血糖(FBG)。骨痂組織標(biāo)本HE染色觀察牽引間隙內(nèi)骨痂生成情況，并進(jìn)行組織學(xué)定量分析

3、牽引間隙內(nèi)骨痂新骨的形成面積以及骨髓腔內(nèi)單位面積脂肪細(xì)胞的數(shù)量。將保存好的左脛骨骨痂標(biāo)本分別做蛋白印跡法(Western-Blot)和實(shí)時(shí)熒光定量核酸擴(kuò)增檢測(cè)系統(tǒng)(Real-time Quantitative PCR Detecting System，QPCR)檢測(cè)。
　　結(jié)果:喂養(yǎng)8周后，實(shí)驗(yàn)組大鼠血清FINs、TG和TC較對(duì)照組升高(P＜0.01)，F(xiàn)BG則無明顯差異(P＞0.05)。實(shí)驗(yàn)10周及實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，實(shí)驗(yàn)組大鼠TG、T

4、C和FBG較對(duì)照組升高(P＜0.01)，而FINs則無明顯差異(P＞0.05)。X線攝片顯示:兩組大鼠脛骨牽引間隙內(nèi)均有骨痂生成，但實(shí)驗(yàn)組骨折斷端牽引間隙內(nèi)骨痂生成較對(duì)照組明顯減少。骨痂組織HE染色示:實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組的微骨柱(MCF)明顯減少，且排列紊亂，微骨柱變短、變小;初始基質(zhì)前沿(PMF)減少。而骨痂的組織學(xué)定量分析則顯示:實(shí)驗(yàn)組骨痂內(nèi)新骨的形成面積較對(duì)照組減少而髓腔內(nèi)單位面積脂肪細(xì)胞數(shù)量增多(P＜0.01)。W-B及QPCR檢測(cè)