非哺乳期乳腺炎性疾病的細(xì)菌學(xué)研究.pdf

1、乳腺炎性疾病約占同期乳腺疾病的1/4，按照乳腺的功能狀態(tài)可以將其分為哺乳期乳腺炎(Lactational abscesses，LA)與非哺乳期乳腺炎(Nonlactationalabscesses，NLA)。哺乳期乳腺炎病因明確，多是由乳汁淤積和細(xì)菌侵入乳管并上行至腺小葉感染引起。非哺乳期乳腺炎病理類型多樣，主要包括導(dǎo)管周圍乳腺炎(periductal mastitis，PDM)、乳腺導(dǎo)管擴(kuò)張癥(mammary duct ectasia

2、，MDE)和特發(fā)性肉芽腫性小葉乳腺炎(idiopathic granulomatous mastitis，IGM)等。其中乳腺導(dǎo)管擴(kuò)張癥和乳腺導(dǎo)管周圍炎在臨床上難以鑒別，而治療方法相同，通常我們將兩者稱為乳腺導(dǎo)管擴(kuò)張/導(dǎo)管周圍炎。
　　 關(guān)于非哺乳期乳腺炎性疾病的病因至今沒(méi)有明確的觀點(diǎn)，早在1989年，Dixon教授研究發(fā)現(xiàn)由乳腺導(dǎo)管擴(kuò)張導(dǎo)致的乳頭溢液患者細(xì)菌培養(yǎng)的陽(yáng)性率明顯高于其他原因所致乳頭溢液的患者，由此提出，細(xì)菌感染是導(dǎo)

3、致本病發(fā)生的主要原因，并認(rèn)為其中的優(yōu)勢(shì)菌群為腸球菌、厭氧性鏈球菌、金黃色葡萄球菌等。在接下來(lái)的幾十年時(shí)間里，包括布魯氏桿菌、沙門氏菌、分枝桿菌、艱難梭菌等在內(nèi)的多種細(xì)菌被認(rèn)為均可導(dǎo)致本病的發(fā)生。最近有學(xué)者提出棒狀桿菌，尤其是kroppenstedtii.棒狀桿菌與肉芽腫性小葉性乳腺炎發(fā)生有著緊密的聯(lián)系。
　　 非哺乳期乳腺炎性疾病與細(xì)菌學(xué)之間的關(guān)系長(zhǎng)期以來(lái)存在爭(zhēng)議，也有學(xué)者提出該類疾病的發(fā)生可能同以下原因相關(guān):i.內(nèi)源性或外源性

4、因素使乳管阻塞導(dǎo)致脂質(zhì)分泌物排泄障礙，最終刺激管壁發(fā)生無(wú)菌性的炎癥反應(yīng)。ii.由于本病后期常常合并大量漿細(xì)胞和淋巴細(xì)胞的浸潤(rùn)，因此自身免疫性因素在本病的發(fā)生、發(fā)展中起關(guān)鍵作用，該病可能是一種自身免疫性的疾病。iii.外傷、異常的激素水平及化學(xué)物質(zhì)的刺激也有可能是誘發(fā)本病的主要原因。
　　 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?
　　 本實(shí)驗(yàn)擬通過(guò)革蘭氏染色、抗酸染色、微生物培養(yǎng)、16S rDNA序列測(cè)定的方法進(jìn)一步研究細(xì)菌與非哺乳期乳腺炎性疾病的關(guān)

5、系，探究乳腺炎性疾病的細(xì)菌學(xué)分布，為探討非哺乳期乳腺炎性疾病的發(fā)病機(jī)制提供理論依據(jù)。
　　 對(duì)象和方法:
　　 選擇2012年6月-2013年3月于我院初治新發(fā)的15例非哺乳期乳腺膿腫患者，于手術(shù)室無(wú)菌條件下取得17份樣本，其中組織樣本12份，膿液樣本5份。
　　 (1)將所有樣品用革蘭染液及抗酸染液染色后，在油鏡下尋找是否有細(xì)菌的感染;
　　 (2)將收集到的5份膿液樣本于30分鐘內(nèi)分別接種于血瓊脂平板

6、和厭氧瓶中。若培養(yǎng)陽(yáng)性，鑒定細(xì)菌的種類;
　　 (3)提取所有樣本的DNA，采用PCR法檢測(cè)所有標(biāo)本中細(xì)菌16S rDNA基因，行瓊脂糖凝膠電泳判斷擴(kuò)增結(jié)果。根據(jù)結(jié)果切膠回收并且行基因測(cè)序，測(cè)序結(jié)果與NCBI基因數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行比對(duì)，鑒定細(xì)菌的種屬。
　　 結(jié)果
　　 (1)細(xì)菌染色組:本次研究所收集的17份樣品經(jīng)革蘭染色后，其中41.1％（7份）查見(jiàn)G+（革蘭氏染色陽(yáng)性）細(xì)菌，35.5％（6份）查見(jiàn)G-（革蘭氏染色陰

7、性）細(xì)菌，11.7％（2份）同時(shí)查見(jiàn)G+及G-細(xì)菌，11.7％（2份）未查見(jiàn)細(xì)菌。所有樣品經(jīng)抗酸染色后均未查見(jiàn)分枝桿菌。
　　 (2)微生物培養(yǎng)及鑒定:5份膿液樣本經(jīng)培養(yǎng)后僅1例陽(yáng)性且呈現(xiàn)兩種菌生長(zhǎng)，經(jīng)分離純化后其中G-桿菌經(jīng)Microsan walkway-96全自動(dòng)微生物分析儀鑒定為黃色短桿菌，G+細(xì)菌鑒定為罕見(jiàn)細(xì)菌生長(zhǎng)。所有樣本均未查見(jiàn)厭氧細(xì)菌生長(zhǎng)。
　　 (3)16S rDNA序列測(cè)定組:本實(shí)驗(yàn)所收集的17份樣本

8、經(jīng)測(cè)序后其中76.5％（13例）呈現(xiàn)不同程度的套峰、雜峰，提示混合感染。另外4份樣本峰圖單一，與NCBI基因數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行比對(duì)，其中2份樣本（來(lái)自于同一患者的組織和膿液）為kroppenstedtii.棒狀桿菌，1份樣本為假單胞菌屬，1份樣本為faecium.腸球菌。
　　 結(jié)論:
　　 本實(shí)驗(yàn)初步確定非哺乳期乳腺炎性疾病與細(xì)菌感染有著密切的聯(lián)系，以混合細(xì)菌感染為主，包括kroppenstedtii.棒狀桿菌、假單胞菌、蠟狀