siRNAs抑制豬圓環(huán)病毒復(fù)制的研究.pdf

1、本研究以圓環(huán)病毒1型(PCV1)和圓環(huán)病毒2型(PCV2)的復(fù)制蛋白R(shí)ep為靶基因，構(gòu)建了3個(gè)針對(duì)圓環(huán)病毒1型(PCV1)和圓環(huán)病毒2型(PCV2)共同靶序列三個(gè)的siRNAs表達(dá)質(zhì)粒(pS-RepA，pS-RepB，pS-RepC)，并在細(xì)胞水平上研究它們對(duì)PCV1和PCV2的復(fù)制的抑制作用。 1．siRNAs對(duì)PCV2 Rep基因表達(dá)的抑制。本研究構(gòu)建了Rep基因與EGFP融合的真核表達(dá)質(zhì)粒(pCDRep-EGFP)，并分別

2、與pS-RepA，pS-RepB和pS-RepC 3個(gè)siRNAs表達(dá)質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染PK-15細(xì)胞。經(jīng)熒光觀察、流式細(xì)胞儀檢測(cè)、Western blot、RT-PCR等方法證實(shí)：pS-RepA，pS．RepB，pS-RepC對(duì)PCV2 Rep基因表達(dá)都有顯著的特異性抑制作用，其中pS-RepA和pS-RepB抑制效果達(dá)到20％-50％，而pS-RepC抑制效果最佳為84.5％。 2．siRNAs對(duì)PCVl和PCV2復(fù)制的抑制。將上述

3、構(gòu)建的3個(gè)siRNAs表達(dá)質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染PK-15細(xì)胞，24小時(shí)后感染PCV1或PCV2病毒，經(jīng)Real-time PCR、Westem blot、TCID<,50>等方法證實(shí)：在3個(gè)siRNAs序列中pS-RepA，pS-RepB，pS-RepC對(duì)PCV1和PCV2的復(fù)制都有特異性抑制作用，其中pS-RepC對(duì)PCV1和PCV2的復(fù)制及結(jié)構(gòu)蛋白的表達(dá)均具有顯著的抑制能力。本研究表明：針對(duì)PCV1和PCV2 Rep蛋白共同靶序列的siRN