siRNAs抑制豬圓環(huán)病毒復(fù)制的研究.pdf

1、本研究以圓環(huán)病毒1型(PCV1)和圓環(huán)病毒2型(PCV2)的復(fù)制蛋白Rep為靶基因，構(gòu)建了3個針對圓環(huán)病毒1型(PCV1)和圓環(huán)病毒2型(PCV2)共同靶序列三個的siRNAs表達質(zhì)粒(pS-RepA，pS-RepB，pS-RepC)，并在細胞水平上研究它們對PCV1和PCV2的復(fù)制的抑制作用。 1．siRNAs對PCV2 Rep基因表達的抑制。本研究構(gòu)建了Rep基因與EGFP融合的真核表達質(zhì)粒(pCDRep-EGFP)，并分別

2、與pS-RepA，pS-RepB和pS-RepC 3個siRNAs表達質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染PK-15細胞。經(jīng)熒光觀察、流式細胞儀檢測、Western blot、RT-PCR等方法證實：pS-RepA，pS．RepB，pS-RepC對PCV2 Rep基因表達都有顯著的特異性抑制作用，其中pS-RepA和pS-RepB抑制效果達到20％-50％，而pS-RepC抑制效果最佳為84.5％。 2．siRNAs對PCVl和PCV2復(fù)制的抑制。將上述

3、構(gòu)建的3個siRNAs表達質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染PK-15細胞，24小時后感染PCV1或PCV2病毒，經(jīng)Real-time PCR、Westem blot、TCID<,50>等方法證實：在3個siRNAs序列中pS-RepA，pS-RepB，pS-RepC對PCV1和PCV2的復(fù)制都有特異性抑制作用，其中pS-RepC對PCV1和PCV2的復(fù)制及結(jié)構(gòu)蛋白的表達均具有顯著的抑制能力。本研究表明：針對PCV1和PCV2 Rep蛋白共同靶序列的siRN