6-OHDA誘導帕金森病大鼠模型行為學評價方法的探討及龍膽苦苷對該模型神經保護作用的研究.pdf

1、帕金森病(Parkinson's disease, PD)是一種中老年人群中常見的神經變性疾??；它以黑質致密部多巴胺能神經元進行性缺失、紋狀體多巴胺水平降低為主要特點，給老年人及其家庭帶來很大痛苦。其臨床特征主要表現為靜止性震顫、肌肉僵直、運動遲緩、姿勢不穩(wěn)。PD的病因多種且發(fā)病機制尚不完全明確。
　　6-羥多巴胺（6-hydroxydopamine,6-OHDA）是神經遞質多巴胺的羥基化衍生物，于1959年首先被Senoh等人成

2、功分離，能高選擇地引起交感神經腎上腺素能神經末梢急性潰變，在1968年，Ungerstedt研究顯示,向黑質致密部注射6-OHDA能夠導致黑質紋狀體的多巴胺系統(tǒng)順行性變性，從而生成第一個制備帕金森病的動物模型。本課題利用6-OHDA定向定量注射SD大鼠左腦紋狀體誘導帕金森病模型。
　　龍膽苦苷(Gentiopicroside)是龍膽和秦艽的有效成分之一，具有抗炎、鎮(zhèn)痛、保肝、利膽、健胃、抗氧化等廣泛的生物學活性，本課題組前期研究發(fā)

3、現其能抑制 MPP+誘導 SH-SY5Y細胞 IκBα降解，抑制NF-κB炎癥信號通路的激活，降低通路相關產物tm TNF-α、IL-1β、iNOS的表達水平，降低由炎癥刺激細胞MMP-9的表達水平，表明龍膽苦苷在以神經炎癥為靶點，對PD的預防和治療可能具有一定的潛在價值。但其在帕金森病動物模型上的神經保護作用未見報道。
　　建立從秦艽中提取龍膽苦苷的提取工藝；建立6-OHDA誘導帕金森病模型的行為學評價體系，為藥物治療該疾病提供

4、科學評價方法；初步探討龍膽苦苷對6-OHDA誘導帕金森病模型的神經保護作用，為PD神經變性的防治和新藥研發(fā)提供可靠的實驗依據。
　　本課題首先應用 SP70大孔樹脂和硅膠提純法從秦艽水提物中分離提純龍膽苦苷；通過向左側腦紋狀體注射定量6-OHDA溶液建立體內誘導損傷PD模型，3周后通過腹腔注射阿撲嗎啡(0.5mg/kg)觀察已造模大鼠向健側旋轉情況來確定造模是否成功（≥7r/min即視為造模成功），分別應用轉棒和曠場分析測定動物的

5、運動功能，應用肌電測試實驗測定大鼠的震顫幅度；行為學評價組大鼠進行行為學評價與分析，建立行為學評價體系；治療組大鼠連續(xù)給藥2周后再次檢測上述行為學并分析各劑量組藥效，同時與給藥前數據比較；通過免疫組化方法檢測大鼠腦部左側黑質中酪氨酸羥化酶(tyrosine hydroxylase, TH)減少情況，探討龍膽苦苷的神經保護作用。
　　從秦艽中提取龍膽苦苷，實驗方法較以往提取工藝創(chuàng)新可行，提取物更加純化，雜質較少，HPLC檢測更接近龍

6、膽苦苷標準品；6-OHDA定量注射左腦紋狀體造模后，腹腔注射給予阿撲嗎啡誘導旋轉圈數明顯升高，說明造模成功；轉棒實驗中部分大鼠在棒時間顯著縮短，曠場實驗中橫向跨格次數減少，出現運動功能障礙；肌電檢測結果顯示部分大鼠肌肉震顫頻率和幅度均增加。對行為學數據分析得出帕金森病分類：震顫型、運動障礙型和混合型；6-OHDA定量注射左腦紋狀體造模后，腹腔注射給予阿撲嗎啡誘導旋轉圈數明顯升高，說明造模成功；與假手術組相比，轉棒實驗中大鼠在棒時間明顯減

7、少，曠場實驗中大鼠活動減少，肌電實驗中大鼠出現不自主震顫，且振幅增大，顯著性差異；連續(xù)給藥2周后，龍膽苦苷各劑量組與陽性藥組均有所改善，但大劑量組改善顯著，30min內旋轉圈數明顯少于模型組，在棒時間延長，活動增加，不自主震顫的振幅減小，與模型組相比有顯著差異；龍膽苦苷高劑量組和陽性藥組可明顯提高TH免疫陽性神經元的數目，改善TH陽性細胞狀態(tài)。
　　從秦艽中提取龍膽苦苷，實驗方法較以往提取工藝創(chuàng)新可行，提取物更加純化，雜質較少；帕

8、金森病行為學體系的建立能夠對帕金森病更好的分型，這對某些藥物針對帕金森病不同的發(fā)病癥狀和種類治療效果不佳加以解釋并歸類，以期對該病的對癥治療有所助益；龍膽苦苷各劑量組對帕金森病的運動障礙、肌肉疲勞度和不自主震顫有所改善，其中大劑量組的改善作用明顯，且尤其對振幅改善顯著，說明龍膽苦苷可能對帕金森病不自主震顫療效優(yōu)于其他行為學，有可能是治療震顫型帕金森病的潛在藥物之一。龍膽苦苷明顯增加TH陽性細胞數目提示其可以改善帕金森病多巴胺數目的減少。