氯化鋰對(duì)魚藤酮誘導(dǎo)的帕金森病細(xì)胞模型保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:探討氯化鋰對(duì)魚藤酮誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞損傷模型保護(hù)作用及其可能的機(jī)制。
　　方法:實(shí)驗(yàn)分溶劑對(duì)照組、魚藤酮模型組、陽性對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組。魚藤酮模型組以500nM的魚藤酮處理細(xì)胞24h,建立多巴胺能細(xì)胞損傷模型;陽性對(duì)照組以終濃度為0.2μM的雷帕霉素預(yù)處理SH-SY5Y細(xì)胞24h后,加入魚藤酮處理24h;溶劑對(duì)照組不加魚藤酮及預(yù)處理藥物,僅以相同體積的溶劑二甲基亞砜(DMSO)處理SH-SY5Y細(xì)胞24h。實(shí)驗(yàn)組分別以終濃

2、度為10mM的Licl、10mMLicl+10mM自噬抑制劑3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)、10mMLicl+10μM自噬抑制劑氯喹(Chloroquine,CHL)、10mM3-MA、10μMCHL預(yù)處理SH-SY5Y細(xì)胞24h后,加入魚藤酮處理24h。顯微鏡下觀察各組細(xì)胞形態(tài),采用四甲基偶氮唑鹽(MTT)比色法檢測(cè)細(xì)胞活性,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率(AnnexinV-FITC/PI)、細(xì)胞內(nèi)活性氧水平(D

3、CFH-DA),熒光顯微鏡下觀察線粒體膜電位(mitochondrialmembranepotentia,MMP)變化及線粒體與LC-3的共定位,Western免疫印記法檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組LC-3Ⅱ表達(dá)量及LC-3?LCⅡ-3Ⅰ蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果:500nM魚藤酮處理SH-SY5Y細(xì)胞24h能夠誘導(dǎo)細(xì)胞活性下降和細(xì)胞凋亡。與自噬激活劑雷帕霉素相同,氯化鋰預(yù)處理能顯著提高魚藤酮誘導(dǎo)損傷的SH-SY5Y細(xì)胞存活率(P<0.05),減輕細(xì)