心水通復方水提物對缺氧誘導心肌細胞AQPs影響的研究.pdf

1、目的:
　　通過借助體外細胞，研究心水通復方水提物對AQPs基因、蛋白表達與細胞線粒體和病理形態(tài)變化之間的關系，試圖揭示該組方防治CHF的作用機制。
　　方法:
　　通過體外缺氧再復氧誘導人心肌細胞，不同濃度心水通復方水提物干預人心肌細胞。運用MTT法、流式細胞術、激光共聚焦、細胞特殊染色、Real-time PCR、細胞免疫組織化學法和Western blot法，檢測細胞活性、細胞損傷和線粒體的變化，以及AQP-1、

2、4、7基因和蛋白的表達之間的關系。
　　結(jié)果:
　　1、MTT法結(jié)果顯示，與模型組相比心水通復方水提物干預組中XST-200和XST-400組的細胞存活率高于模型組，具有顯著性差異(p＜0.05）。
　　2、流式細胞術檢測線粒體膜電位變化及激光共聚焦觀察JC-1染色結(jié)果顯示，模型組細胞線粒體膜電位明顯降低，與正常組相比有顯著性差異(P＜0.05）。心水通復方水提物組中XST-400組線粒體膜電位高于模型組且有顯著性差異

3、（P＜0.05）。
　　3、Lysotracker Red染色結(jié)果顯示，模型組溶酶體紅色光比值明顯降低，與正常組相比有顯著性差異(P＜0.05)。心水通復方水提物組中XST-400與XST-600組紅色光比值均高于模型組，與模型組相比均有顯著性差異（P＜0.05）。
　　4、Real-time PCR結(jié)果顯示，缺氧再復氧人心肌細胞模型組AQP-1、4、7mRNA表達比正常組顯著增高（P＜0.05）。在心水通復方水提物200μ

4、g/ml～600μ g/ml范圍內(nèi)，AQP-1mRNA的表達水平隨著濃度增加而增高;而在XST-400μg/ml，AQP-4、7mRNA的表達明顯比200μ g/ml和600μg/ml降低(P＜0.05)，其原因有待進一步研究。
　　5、細胞免疫組織化學結(jié)果顯示，在人心肌細胞中均可以檢測到AQP-1、4、7蛋白的表達。經(jīng)過缺氧再復氧人心肌細胞模型組中AQP-1、4、7蛋白表達上調(diào)，模型組陽性細胞較正常對照組增多，且模型組積分光密度

5、高于正常對照組（P＜0.05）。在心水通水提物XST-200和XST-400干預組中，AQP-1的陽性細胞數(shù)比模型組少，其積分光密度比模型組低(P＜0.05）。提示:XST在濃度為200-400μg/ml能夠顯著下調(diào)缺氧誘導心肌細胞的AQP-1蛋白表達(P＜0.05)。而XST-400干預組的AQP-4、7的陽性細胞數(shù)量與積分光密度比模型組的陽性細胞減少。說明XST400μg/ml能夠顯著下調(diào)缺氧誘導心肌細胞AQP-4、7蛋白的表達（P

6、＜0.05）。
　　6、Western blot結(jié)果顯示，缺氧再復氧人心肌細胞模型組中AQP-1、4、7蛋白的表達均上調(diào)。心水通水提物能劑量依賴性地上調(diào)缺氧再復氧人心肌細胞AQP-1的表達，XST-600μg/ml能將AQP-1的蛋白表達恢復到接近正常對照組水平。XST-400組能夠顯著下調(diào)AQP-4、7蛋白的表達（P＜0.05）。
　　結(jié)論:
　　1.心水通復方水提物能提高缺氧誘導人心肌細胞的耐受，能增強細胞的存活率

7、，對缺氧誘導細胞具有較好的保護作用;
　　2.心水通復方水提物通過穩(wěn)定線粒體膜電位和穩(wěn)定溶酶體，減緩線粒體氧化應激性損傷和維持溶酶體酶的活性，可能是保護心肌細胞缺氧再復氧性損傷的機制之一;
　　3.人心肌細胞經(jīng)過缺氧再復氧后AQP-1、4、7基因與蛋白表達上調(diào);
　　4.心水通復方水提物不同濃度干預缺氧再復氧人心肌細胞，對AQP-1、4、7基因和蛋白表達均有不同影響。AQP-1呈劑量依賴性增高，而AQP-4、7的表達與