他莫昔芬處理子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞后ARID1A、ERα、ERβ、PR、P53變化的研究.pdf

1、目的:子宮內(nèi)膜癌是女性生殖系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤，子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生、發(fā)展與很多因素有關(guān)，如長(zhǎng)期雌激素刺激同時(shí)無(wú)孕激素拮抗等機(jī)制。同時(shí)，他莫昔芬(tamoxifen TAM)作用后，子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生率明顯升高。但是，目前對(duì)于TAM引起子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病機(jī)制仍不清楚。關(guān)于染色體重組復(fù)合物的研究日益增多，具有抑制DNA合成的作用，故其突變低表達(dá)能夠促進(jìn)細(xì)胞無(wú)限分裂，進(jìn)而發(fā)展成癌。ARID1A(AT-richinteracting domain c

2、ontaining protein，又稱腦蛋白120、SMARCF1、p270等）是染色質(zhì)重組復(fù)合物之一，同時(shí)作為抑癌基因，在多種腫瘤組織中存在突變。目前對(duì)于ARID1A的結(jié)構(gòu)研究較多，對(duì)其在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)及生物學(xué)功能的研究較少。本研究通過(guò)檢測(cè)ARID1A、ERα、ERβ、PR、P53在子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞(高分化Ishikawa、中分化HEC-1A及低分化KLE)中的基因和蛋白的表達(dá)水平，并進(jìn)一步分析TAM及雌激素(estrogen E

3、2)處理后子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞中ARID1A、ERα、ERβ、PR、P53基因和蛋白的表達(dá)水平變化，探討ARID1A在子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生、發(fā)展中的可能作用機(jī)制。
　　方法:
　　1應(yīng)用實(shí)時(shí)定量qRT-PCR法檢測(cè)正常子宮內(nèi)膜組織、子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株（Ishikawa、HEC-1A、KLE）中ARID1A、ERα、ERβ、PR、P53 mRNA的表達(dá)水平。
　　2應(yīng)用實(shí)時(shí)定量qRT-PCR法檢測(cè)TAM及E2依據(jù)不同濃度及不同時(shí)間處

4、理細(xì)胞后ARID1A、ERα、ERβ、PR、P53 mRNA的表達(dá)水平。
　　3應(yīng)用Western-blot法檢測(cè)正常子宮內(nèi)膜組織、子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株（Ishikawa、HEC-1A、KLE）中BAF250a、ERα、ERβ、PR、P53蛋白的表達(dá)水平。
　　4應(yīng)用Western-blot法檢測(cè)TAM及E2依據(jù)不同濃度及不同時(shí)間處理細(xì)胞后BAF250a、ERα、ERβ、PR、P53蛋白的表達(dá)水平。
　　5應(yīng)用流式細(xì)胞學(xué)測(cè)

5、定TAM及E2依據(jù)不同濃度及不同時(shí)間處理細(xì)胞后細(xì)胞周期變化情況。
　　結(jié)果:
　　1 ARID1A、ERα、ERβ mRNA及蛋白在三種子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞中的表達(dá)均顯著低于其在正常子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)，經(jīng)過(guò)TAM或E2處理后，ARID1A、ERα、ERβ mRNA及蛋白表達(dá)量隨著藥物濃度的增加而降低，隨著藥物處理時(shí)間的延長(zhǎng)而降低(P＜0.05)，而PR、P53 mRNA及蛋白在三種子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞中的表達(dá)低于其在正常子宮內(nèi)膜組織中

6、的表達(dá)，經(jīng)過(guò)TAM或E2處理后，PR、P53 mRNA及蛋白表達(dá)量隨著藥物濃度的增加而增加，隨著藥物處理時(shí)間的延長(zhǎng)而增加，但均低于其在正常子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)（P＜0.05），呈時(shí)間-劑量依賴性。
　　2經(jīng)過(guò)不同濃度TAM或E2在不同時(shí)間處理三種子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞(Ishikawa、HEC-1A、KLE)后，三種細(xì)胞均表現(xiàn)為G0/G1期縮短，S期延長(zhǎng)，且隨著藥物濃度的增高及處理時(shí)間的延長(zhǎng)，G0/G1期逐漸縮短，S期逐漸延長(zhǎng)（P＜0.0

7、5）。
　　結(jié)論:
　　1 TAM或E2處理子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞后ARID1A、ERα、ERβmRNA及蛋白的表達(dá)明顯低于其在未經(jīng)藥物處理子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)，而PR、P53 mRNA及蛋白的表達(dá)明顯高于其在未經(jīng)藥物處理子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)。
　　2 TAM與E2可能通過(guò)下調(diào)ARID1A的表達(dá)而引起子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生，而且ARID1A的下調(diào)可能與ER、P53存在一定相互作用關(guān)系。
　　3經(jīng)TAM與E2處理后子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的細(xì)