肼苯噠嗪聯(lián)合他莫昔芬對(duì)ERα陰性乳腺癌細(xì)胞抑制作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:應(yīng)用甲基化特異性PCR(methylation specific PCR,MSP)檢測(cè)人類乳腺癌ERα陰性細(xì)胞株MDA-MB-231和MDA-MB-435ERα基因5'端核心啟動(dòng)子區(qū)CpG島甲基化情況,探索ERα基因表達(dá)沉默是否與其基因核心啟動(dòng)子區(qū)CpG島甲基化有關(guān);觀察肼苯噠嗪能否作為去甲基化藥物誘導(dǎo)ERα基因表達(dá),恢復(fù)ERα陰性乳腺癌細(xì)胞對(duì)他莫昔芬敏感性,并進(jìn)一步探討肼苯噠嗪聯(lián)合他莫昔芬對(duì)ERα陰性乳腺癌細(xì)胞抑制作用,為ERα

2、陰性乳腺癌開(kāi)辟新的內(nèi)分泌治療途徑提供實(shí)驗(yàn)依據(jù).方法:(1)利用MSP檢測(cè)ERα陰性MDA-MB-231和MDA-MB-435乳腺癌細(xì)胞ERα基因5'端核心啟動(dòng)子區(qū)CpG島甲基化狀態(tài);(2)不同濃度肼苯噠嗪處理上述兩種乳腺癌細(xì)胞,RT-PCR檢測(cè)ERα和maspin mRNA表達(dá)情況;(3)將上述兩種細(xì)胞各分為四組,分別為肼苯噠嗪和他莫昔芬單藥作用組、聯(lián)合用藥組、對(duì)照組、MTT檢測(cè)各線細(xì)胞生長(zhǎng)情況,流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡,電鏡觀

3、察細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的變化.結(jié)論:(1)ERα陰性MDA-MB-231和MDA-MB-435乳腺癌細(xì)胞ERα基因5'端核心啟動(dòng)子區(qū)存在CpG島甲基化,可能是導(dǎo)致ERα基因表達(dá)沉默的主要原因;(2)肼苯噠嗪能作為去甲基化藥物誘導(dǎo)因啟動(dòng)子區(qū)CpG島甲基化而表達(dá)沉默的ERα基因表達(dá),同時(shí)亦能誘導(dǎo)因甲基化失活的腫瘤抑制基因maspin再表達(dá),說(shuō)明肼苯噠嗪作為去甲基化藥物誘導(dǎo)基因表達(dá)不具有基因特異性:(3)肼苯噠嗪能抑制ERα陰性乳腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)、誘導(dǎo)細(xì)