奈達鉑、藤黃酸對A549-DDP細胞的作用及其機制研究.pdf

1、目的:
　　本課題通過體外實驗探討奈達鉑(NDP)、藤黃酸(GA)對順鉑(DDP)耐藥非小細胞肺癌細胞株(A549/DDP)作用及其機制，旨在為篩選有效抗腫瘤藥物和制定更加有效的順鉑耐藥非小細胞肺癌治療方案提供實驗依據(jù)。
　　方法:
　　1.應(yīng)用MTT方法研究DDP、NDP、GA單藥以及DDP聯(lián)合GA對A549/DDP細胞的生長抑制情況。
　　2.應(yīng)用等輻射分析方法進行DDP和GA聯(lián)合作用與DDP、GA單藥作用的

2、差異分析比較。
　　3.應(yīng)用流式細胞術(shù)檢測各單藥或組合對A549/DDP細胞凋亡與細胞周期的影響。
　　4.應(yīng)用細胞免疫組織化學(xué)法定性及定位檢測DDP、NDP、GA單藥以及DDP聯(lián)合GA處理A549/DDP后的P-gp、P53、Bcl-2及Bax的表達。
　　5.應(yīng)用蛋白質(zhì)印跡法定量檢測DDP、NDP、GA單藥以及DDP聯(lián)合GA處理A549/DDP后的P-gp、P53、Bcl-2及Bax的表達
　　結(jié)果:

3、　　1.在A549/DDP和A549細胞中，DDP的IC50(23.36±1.41μg/ml、2.53±0.12μg/ml)具有明顯差異(P＜0.001)，顯示A549/DDP細胞的耐DDP的特性。
　　2.在A549/DDP細胞中， NDP的 IC50(19.97±0.88μg/ml)與 DDP的IC50(23.36±1.41μg/ml)具有統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.024)。NDP作用使A549/DDP細胞產(chǎn)生明顯G2期阻滯(P=0

4、.005);也較DDP顯著促進A549/DDP細胞早期及晚期凋亡(P=0.010、P=0.005)。
　　3.根據(jù)等輻射分析法，較低濃度DDP聯(lián)合GA即可對A549/DDP細胞增殖產(chǎn)生50％抑制率（8.47±0.94:0.4μg/ml和4.58±0.95:0.8μg/ml）。DDP聯(lián)合GA作用較DDP、GA單藥亦可明顯誘導(dǎo)A549/DDP細胞產(chǎn)生G2期阻滯(P=0.02、P=0.012);亦可明顯提高A549/DDP細胞早期及晚期

5、凋亡率(P=0.015，P=0.015;P=0.005，P=0.010)。
　　4.NDP作用下的A549/DDP細胞P-gP、P53及Bcl-2表達較DDP作用明顯降低(P=0.014;P=0.020;P=0.008)，而Bax表達顯著增加(P=0.024)，其中以Bcl-2表達降低最顯著(P=0.020); DDP聯(lián)合GA作用下的A549/DDP細胞P-gP、P53及Bcl-2表達較DDP、GA單藥作用明顯降低(P=0.006

6、，P=0.017;P＜0.01，P=0.001;P=0.007，P=0.004)，Bax表達增加(P=0.006，P=0.007)，其中以P53表達降低最顯著(P＜0.01，P=0.001)。
　　5.ERCC1在A549及A549/DDP細胞中均有表達，且表達無明顯差異。
　　結(jié)論:
　　1、NDP對A549/DDP細胞有明顯的抑制細胞生長、阻滯細胞周期及誘導(dǎo)細胞凋亡的作用。
　　2、較低濃度的DDP聯(lián)合GA即

7、可對A549/DDP細胞產(chǎn)生明顯的抑制生長、細胞周期阻滯及誘導(dǎo)凋亡作用，兩者具有協(xié)同抗腫瘤作用。
　　3、NDP及GA聯(lián)合DDP可能通過抑制P-gP表達、調(diào)節(jié)Bcl-2及Bax表達以及可能下調(diào)突變型P53表達，以減弱腫瘤細胞泵出抗癌藥物及DNA修復(fù)能力，增強腫瘤細胞促凋亡作用，達到拮抗A549/DDP的目的。其中NDP以下調(diào)Bcl-2的表達為主，而DDP聯(lián)合GA則以下調(diào)突變型P53的表達更明顯。
　　4、目前免疫組織化學(xué)法檢