蘆薈大黃素逆轉(zhuǎn)人肺腺癌耐藥細(xì)胞A549-DDP耐順鉑的作用及機(jī)制的初步研究.pdf

1、目的： 測定蘆薈大黃素(Aloe Emodin，AE)對人肺腺癌細(xì)胞株A549及A549/DDP的細(xì)胞毒性，確定蘆薈大黃素的無細(xì)胞毒性濃度；檢測此濃度的蘆薈大黃素能否逆轉(zhuǎn)A549/DDP株細(xì)胞對順鉑的耐藥性，并初步探討其可能的機(jī)制。 方法： 1、取對數(shù)生長期A549、A549/DDP細(xì)胞，設(shè)立蘆薈大黃素組：濃度為2.5μg·mL-1、5μg·mL-1、10μg·mL-1、15μg·mL-1、20 μg·mL-1；

2、陰性對照組：加培養(yǎng)液；溶劑對照組：0.1％二甲基(Diaminobenzidine，DMSO)和空白對照組：不加細(xì)胞。用MTT法檢測蘆薈大黃素對A549及A549/DDP細(xì)胞作用24h、48h、72h的細(xì)胞毒作用，確定蘆薈大黃素作用48h無細(xì)胞毒性濃度。 2、用順鉑(濃度為：0.125μg·mL-1、0.25μg·mL-1、0.5μg·mL-1、1.0 μg·mL-1、2.0 μg·mL-1、4.0μg·mL-1、8.0μg·m

3、L-1、16μg·mL-1、24μg·mL-1、32μg·mL-1)分別處理A549、A549/DDP細(xì)胞48h，MTT法檢測抑制效應(yīng)，并求出A549/DDP對DDP耐藥倍數(shù)。 3、MTT法檢測無細(xì)胞毒性濃度蘆薈大黃素與順鉑(濃度為：0.125μg·mL-1、0.25μg·mL-1、0.5μg·mL-1、1.0μg·mL-1、2.0 μg·mL-1、4.0μg·mL-1、8.0 μg·mL-1、16μg·mL-1、24μg·mL

4、-1、32μg·mL-1)聯(lián)用對A549/DDP的抑制效應(yīng)，求出蘆薈大黃素對A549/DDP耐藥逆轉(zhuǎn)倍數(shù)。 4、無細(xì)胞毒性濃度的蘆薈大黃素對A549/DDP株細(xì)胞生長曲線及倍增時間的影響。 5、電感耦合等離子體質(zhì)譜(ICP-MS)法測定A549和A549/DDP細(xì)胞內(nèi)順鉑濃度，初步探討蘆薈大黃素逆轉(zhuǎn)多藥耐藥可能的作用機(jī)理。 結(jié)果： 1、MTT比色法結(jié)果顯示：AE可明顯抑制體外培養(yǎng)的A549株和A549/D

5、DP株細(xì)胞的增殖，且抑制程度隨蘆薈大黃素作用時間和濃度的增加而增加，呈一定的時間、劑量(2.5-20μg·mL-1)依賴性，表明AE本身有細(xì)胞毒性作用，能抑制肺腺癌細(xì)胞的增殖；低于或等于5μg.mL-1的AE作用48h對A549和A549/DDP兩株細(xì)胞均無明顯毒性(IR＜10％)，將5μg·mL-1確定為AE的無細(xì)胞毒性濃度。 2、A549細(xì)胞的IC50為1.344μg·mL-1，A549/DDP細(xì)胞的IC50為16.81μg

6、·mL-1，A549/DDP耐藥倍數(shù)為12.51倍；無細(xì)胞毒濃度(5μg·mL-1)AE與DDP合用時，A549/DDP細(xì)胞的IC50降為5.86 μg·mL-1，逆轉(zhuǎn)倍數(shù)為2.87，說明AE增強了DDP對A549/DDP株細(xì)胞的殺傷作用，即與DDP合用時，能恢復(fù)DDP對A549/DDP細(xì)胞的敏感性，表明AE具有化療增敏作用，與細(xì)胞計數(shù)繪制生長曲線結(jié)果相一致。 3、電感偶合等離子質(zhì)譜法結(jié)果顯示：無細(xì)胞毒濃度(5μg·mL-1)A

7、E與4μg·mL-1DDP合用后，能顯著增加A549/DDP株細(xì)胞內(nèi)DDP的積累，而未見顯著增加A549細(xì)胞內(nèi)DDP的積累。 結(jié)論： 1、AE對A549株和A549/DDP株細(xì)胞的生長有明顯的抑制作用，且隨AE濃度及作用時間的增加而增加，生長抑制率呈藥物濃度.時間依賴方式。表明AE本身對兩株細(xì)胞有增殖抑制作用。 2、5μg·mL-1為AE的無細(xì)胞毒性濃度。此濃度的AE能明顯增強DDP對人肺腺癌細(xì)胞耐藥株A549/