EB病毒相關胃癌腫瘤局部免疫與腫瘤細胞凋亡.pdf

1、EB病毒為自然界廣泛存在的皰疹病毒科DNA致瘤病毒，人群感染率高達90％以上，是傳染性單核細胞增多癥的病原體，同時與某些人類惡性腫瘤如鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)、Burkitt's淋巴瘤(BL)、霍奇金淋巴瘤以及免疫缺陷病人淋巴瘤等的發(fā)生密切相關。近三十年來研究表明，世界范圍內約1.3-18％的胃癌與EBV感染密切相關，這部分胃癌稱為EB病毒相關胃癌。
　　 EBVaGC具有獨特的臨床病理

2、特征，然而關于EBVaGC的預后意見不一。目前認為腫瘤的預后同時取決于腫瘤本身的惡性程度和宿主免疫系統(tǒng)的抵抗作用。因此，研究EBVaGC患者的腫瘤免疫狀態(tài)有助于我們進一步理解EBVaGCC的生物學行為和臨床病理特征，為EBVaGC免疫治療提供理論依據(jù)。
　　 腫瘤免疫可分為全身免疫和局部免疫。腫瘤局部免疫作為腫瘤與機體作用的主要部位，在患者體內處于機體免疫系統(tǒng)與腫瘤相互作用的最前沿，一定程度上反映機體抗腫瘤反應的強度和總體水平。

3、腫瘤在機體的免疫監(jiān)視下生長，在腫瘤局部存在機體抗腫瘤免疫反應和腫瘤微環(huán)境免疫抑制作用。研究表明，惡性腫瘤患者局部免疫學的改變與腫瘤的演變與病程密切相關，患者的免疫功能由早期的活躍狀態(tài)發(fā)展到不同程度的免疫抑制，病期越晚，免疫抑制越強。研究發(fā)現(xiàn)，與EBV密切相關的鼻咽癌患者外周血的免疫反應可被激活，而腫瘤局部免疫狀態(tài)受到抑制，因此推測腫瘤局部免疫狀態(tài)受到抑制而非全身免疫缺陷可能是鼻咽癌的發(fā)病機制之一。那么同為上皮性腫瘤的EBVaGC的腫瘤局

4、部免疫狀態(tài)怎樣?是否存在免疫抑制?
　　 EBVaGC組織中有明顯的淋巴細胞浸潤傾向，而對于EBVaGC中腫瘤浸潤免疫細胞的亞型及其在腫瘤免疫中的作用研究較少。目前僅有4篇文獻發(fā)現(xiàn)腫瘤浸潤免疫細胞多數(shù)為具有增殖活性的CD8+細胞毒性T細胞，但未見有關EBVaGC腫瘤局部免疫抑制因素的研究。
　　 我們課題組共收集了676例普通胃癌和26例殘胃癌手術切除標本，用EBER原位雜交方法分別篩選出46例(6.8％)和8例(34.

5、6％)EBVaGC，并對EBVaGC的臨床病理特征和潛伏類型進行了研究；本課題擬在此基礎上，采用免疫組化方法及末端脫氧核苷酸轉移酶介導核苷酸缺口標記技術(Tdt-mediated-dUTP nickend labeling，TUNEL)研究EBVaGC組織中的腫瘤局部免疫狀態(tài)及其與腫瘤細胞凋亡的關系。
　　 本課題分為以下二部分：
　　 第一部分普通胃癌中EB病毒相關胃癌腫瘤局部免疫與腫瘤細胞凋亡
　　 目的：<

6、br>　　 1.研究普通胃癌中EBVaGC組織中的腫瘤局部免疫狀態(tài)。
　　 2.探討普通胃癌EBVaGC組織中的腫瘤局部免疫狀態(tài)與腫瘤細胞凋亡的關系。
　　 材料和方法：
　　 1.采用免疫組化方法檢測普通胃癌EBVaGC中CD3、CD79α、CD56、Fascin標記的TIL-T細胞、B細胞、NK細胞、DC細胞，并對CD3+TIL-T細胞進行CD4和CD8亞群分析。
　　 2.采用免疫組化方法檢測Ki

7、67、IL-1β、顆粒酶B、FasL、IFN-γ/TNF-α在普通胃癌EBVaGC中CD8+T細胞的表達，研究CD8+T細胞數(shù)量增多的原因和功能狀態(tài)。
　　 3.采用TUNEL技術檢測普通胃癌EBVaGC腫瘤細胞的凋亡，并通過免疫組化方法檢測IL-10、FoxP3、Survivin、NF-κBp65、FasL在腫瘤細胞的表達，探討普通胃癌EBVaGC組織中的腫瘤局部免疫狀態(tài)與腫瘤細胞凋亡的關系。
　　 結果：
　　

8、 1.普通胃癌EBVaGC中的CD3+TIL-T細胞、CD79α+B細胞和CD56+NK細胞數(shù)量均比EBVnGC多(P＜0.001，P=0.003，P=0.04)，腫瘤浸潤淋巴細胞主要為CD3+TIL-T細胞。EBVaGC中CD8+T細胞的數(shù)量比EBVnGC多(P＜0.001)，而CD4+T細胞數(shù)量兩組間差別無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。EBVaGC中CD3+TIL-T細胞多數(shù)為CD8+T細胞。EBVaGC中CD4/CD8比值明顯低于

9、EBVnGC組(P=0.004)。EBVaGC中的Fascin+的樹突細胞數(shù)量、FoxP3+的CD4+CD25+Treg細胞數(shù)量均比EBVnGC多(P=0.012，P=0.033)。
　　 2.普通胃癌EBVaGC中Ki67、IL-1β、Granzyme B、IFN-γ陽性的CD8+T細胞百分率均比EBVnGC中高(P=0.001，P=0.038，P=0.003，P＜0.001)。而FasL蛋白在CD8+T細胞的陽性表達率和TN

10、F-α平均陽性CD8+T細胞百分率在EBVaGC和EBVnGC中的差異無統(tǒng)計學意義(P值均＞0.05)。EBVaGC中的IL-10平均陽性淋巴細胞百分率比EBVnGC中高(P=0.004)。
　　 3.普通胃癌EBVaGC的腫瘤細胞凋亡指數(shù)低于EBVnGC腫瘤細胞的凋亡指數(shù)(P=0.013)。Survivin、NF-κBp65、FasL在腫瘤細胞的表達強度均比EBVnGC中高(P=0.034，P=0.012，P=0.03)，Su

11、rvivin與LMP2A、NF-κBp65與LMP2A、Survivin與NF-κBp65在EBVaGC中腫瘤細胞的表達均有關聯(lián)性。EBVaGC中的腫瘤細胞IFN-γ、IL-1β、IL-10平均陽性細胞百分率均比EBVnGC中高(P＜0.001，P=0.026，P=0.001)，而TNF-α每高倍視野內TNF-α平均陽性腫瘤細胞百分率在EBVaGC和EBVnGC中差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　 結論：
　　 1

12、.在EBVaGC腫瘤局部免疫中存在免疫激活和免疫抑制兩方面的作用，在進展期EBVaGC中免疫抑制作用可能更明顯。
　　 2.EBVaGC中腫瘤細胞凋亡減少可能是由于：a.進展期EBVaGC中腫瘤免疫抑制作用可能更明顯；b.EBV編碼的蛋白LMP2A有可能通過上調Survivin的表達抑制腫瘤細胞的凋亡。
　　 第二部分殘胃癌中EB病毒相關胃癌腫瘤局部免疫與腫瘤細胞凋亡
　　 目的：
　　 1.研究殘胃癌E

13、BVaGC組織中的腫瘤局部免疫狀態(tài)。
　　 2.探討殘胃癌EBVaGC組織中的腫瘤局部免疫狀態(tài)與腫瘤細胞凋亡的關系。
　　 材料和方法：
　　 1.采用免疫組化方法檢測殘胃癌EBVaGC中CD3、CD79α、CD56、Fascin標記的TIL-T細胞、B細胞、NK細胞、DC細胞，并對CD3+TIL-T進行CD4和CD8亞群分析。
　　 2.采用免疫組化方法檢測Ki67、IL-1β、顆粒酶B、FasL、IF

14、N-γ/TNF-α在殘胃癌EBVaGC中CD8+T細胞的表達，研究CD8+T細胞數(shù)量增多的原因和功能狀態(tài)。
　　 3.采用TUNEL技術檢測殘胃癌EBVaGC腫瘤細胞的凋亡，并通過免疫組化方法檢測IL-10、FoxP3、Survivin、NF-κBp65、FasL在腫瘤細胞的表達，探討殘胃癌EBVaGC組織中的腫瘤局部免疫狀態(tài)與腫瘤細胞凋亡的關系并比較普通胃癌EBVaGC和殘胃癌EBVaGC中的腫瘤局部免疫狀態(tài)和腫瘤細胞凋亡的異

15、同。
　　 結果：
　　 1.殘胃癌EBVaGC中的CD3+TIL-T細胞、CD79α+B細胞和CD56+NK細胞數(shù)量均比EBVnGC多(P=0.017，P=0.014，P=0.008)，腫瘤浸潤淋巴細胞主要為CD3+TIL-T細胞。殘胃癌EBVaGC中的CD8+T細胞數(shù)量比EBVnGC多(P=0.007)，而EBVaGC中CD4+T細胞數(shù)量比EBVnGC少(P=0.048)。EBVaGC中CD3+TIL-T細胞多數(shù)為C

16、D8+T細胞。EBVaGC中CD4/CD8比值明顯低于EBVnGC組(P=0.005)。EBVaGC中的Fascin+的TIDC數(shù)量、FoxP3+的CD4+CD25+Treg細胞數(shù)量均比EBVnGC多(P=0.035，P=0.028)。
　　 2.殘胃癌EBVaGC中Ki67、IL-1β、顆粒酶B、IFN-γ陽性的CD8+T細胞百分率均比EBVnGC高(P=0.006，P=0.003，P=0.027，P=0.048)。而FasL

17、蛋白在CD8+T細胞的陽性表達率和TNF-α平均陽性CD8+T細胞百分率在EBVaGC和EBVnGC中的差異無統(tǒng)計學意義(P值均＞0.05)。EBVaGC中的IL-10平均陽性淋巴細胞百分率比EBVnGC中高(P=0.040)。
　　 3.殘胃癌EBVaGC的腫瘤細胞凋亡指數(shù)低于EBVnGC腫瘤細胞的凋亡指數(shù)(P=0.042)。EBVaGC中的Survivin的表達強度比EBVnGC中高(P＜0.001)，而NF-κBp65、F

18、asL、IFN-γ、TNF-α、IL-1β、IL-10在殘胃癌EBVaCC和EBVnGC中表達差別均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　 4.殘胃癌中EBVaGC中的CD4+T細胞數(shù)量和CD4/CD8比值明顯比普通胃癌EBVaGC中小(P=0.006，P=0.012)。Survivin在殘胃癌EBVaGC中腫瘤細胞的表達強度強于普通胃癌EBVaGC(P＜0.001)。
　　 結論：
　　 殘胃癌EBVaGC的腫瘤