PI3K-AKT信號轉(zhuǎn)導通路與人舌鱗癌細胞TCA8113順鉑耐藥的相關(guān)性研究.pdf

1、實驗目的:
　　通過觀察單用LY294002，順鉑以及LY294002與順鉑聯(lián)合應用對細胞的抑制增殖作用，探討PI3K特異性抑制劑LY294002逆轉(zhuǎn)順鉑耐藥口腔鱗癌細胞TCA8113/CDDP的可行性。
　　材料與方法：
　　1.間歇的給藥，逐漸的增加劑量，連續(xù)在體外誘導培養(yǎng)人舌磷癌順鉑耐藥細胞；加藥培養(yǎng)2天，培養(yǎng)基中含0.3μg/mL的CDDP，2天后更換成正常培養(yǎng)液。待細胞正常傳代后重復加藥一次。在進入下一個濃度

2、(以起始濃度的1倍間歇性加藥)前培養(yǎng)一周，誘導耐藥細胞產(chǎn)生。
　　2.實驗分為耐藥細胞TCA8113/CDDP組和正常癌細胞TCA8113組。分別以5μmol/l，10μmol/l，20μmol/l，40μmol/l濃度 LY294002分別作用于 TCA8113和TCA8113/CDDP細胞24h，48h；聯(lián)合抑制率以各細胞順鉑IC50濃度聯(lián)合LY294002作用于兩組細胞24h。MTT法對比藥物對兩種細胞抑制率的影響。

3、　　3.實驗分為空白組，對照組，實驗組?？瞻捉M不加藥物，對照組加順鉑IC50濃度，實驗組分別加濃度為5μmol/l，10μmol/l，20μmol/l，40μmol/l PI3K抑制劑LY294002和順鉑，濃度為其相應的IC50值。藥物作用時間為24h，24h后提取總蛋白質(zhì)，采用蛋白免疫印跡的方法分析LY294002作用前后通路相關(guān)蛋白p-Akt、Akt、PI3K的表達。結(jié)果
　　1.建立TCA8113/CDDP耐藥細胞，耐藥倍

4、數(shù)為7.7。
　　2. MTT顯示作用時間越長，作用濃度的越大，LY294002對 TCA8113及TCA8113/CDDP細胞的抑制作用越強。LY294002與順鉑聯(lián)合應用對兩種細胞的抑制作用比單用順鉑效果好。
　　3. PI3K、Akt、p-AKT蛋白表達明顯降低。其中TCA8113/CDDP細胞中PI3K、AKT、p-AKT蛋白的表達比TCA8113細胞明顯增多(p<0.05)。
　　結(jié)論：
　　1. LY