低劑量砷聯(lián)合Cyclopamine協(xié)同抑制非雄激素依賴的前列腺癌PC3細(xì)胞生長的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:前列腺癌(Prostatic cancer,Pca)是西方國家最常見的男性惡性腫瘤，而近年我國該病發(fā)病率亦逐年上升，大部分患者最終會(huì)進(jìn)展為非雄激素依賴的Pca，但目前尚無公認(rèn)可以有效的治療非雄激素依賴Pca的手段。因此，尋求可以有效治療非雄激素依賴前列腺癌的新的治療手段是目前臨床迫切需要解決的問題。三氧化二砷(Arsenic trioxide，As203，ATO)已被證實(shí)對(duì)于治療復(fù)發(fā)性或難治性急性早幼粒細(xì)胞白血病(APL)具有良好

2、療效。但某些二期臨床試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)單獨(dú)用ATO治療一些實(shí)體瘤，如轉(zhuǎn)移性腎細(xì)胞癌或轉(zhuǎn)移性黑色素瘤，其療效相對(duì)有限。故尋找一種輔助藥物，與ATO聯(lián)合使用，使低濃度的ATO發(fā)揮高濃度的作用效果，并降低潛在的毒副作用，很有可能是一種改進(jìn)ATO治療某些實(shí)體腫瘤的可行有效的方法。Hedgehog(Hh)信號(hào)通路晚期前列腺癌中呈高表達(dá)。最近研究表明ATO能夠通過抑制Hh信號(hào)通路下游GLI蛋白而抑制尤文肉瘤和生神經(jīng)管細(xì)胞瘤的增殖;而Smo阻滯劑Cyclo

3、pamine(CYC)亦可通過對(duì)Hh信號(hào)通路的阻滯作用而抑制前列腺癌等腫瘤的生長。故本實(shí)驗(yàn)選取非雄激素依賴前列腺癌PC3細(xì)胞為研究對(duì)象，觀察低劑量三氧化二砷聯(lián)合Cyclopamine對(duì)PC3細(xì)胞的抑制作用及其可能的分子作用機(jī)制。
　　方法:1.運(yùn)用免疫熒光及DAPI染色鑒定PC3細(xì)胞及PC3細(xì)胞內(nèi)HH-GLI信號(hào)通路的表達(dá)情況。2.采用MTT比色法檢測(cè)不同濃度ATO及Cyclopamine單獨(dú)或聯(lián)合使用對(duì)不同的時(shí)間點(diǎn)PC3細(xì)胞生長

4、的抑制。3.應(yīng)用裸鼠致瘤實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證ATO聯(lián)合Cyclopamine對(duì)PC3細(xì)胞生長的抑制效果。4.Real-time PCR法檢測(cè)ATO聯(lián)合Cyclopamine對(duì)PC3細(xì)胞內(nèi)Hh信號(hào)通路中重要分子的mRNA的表達(dá)的影響。5.檢測(cè)ATO聯(lián)合Cyclopamine對(duì)PC3細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期的影響。
　　結(jié)果:1.免疫熒光劑DAPI染色結(jié)果顯示腫瘤增殖抗原Ki67、前列腺特異性膜抗原PSAM及HH-GLI1信號(hào)通路中重要的核

5、內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子GLI1均在PC3細(xì)胞中呈高表達(dá)2.MTT結(jié)果顯示ATO或Cyclopamine單獨(dú)使用均能抑制PC3細(xì)胞的生長，呈現(xiàn)明顯的劑量及時(shí)間依賴性;二者聯(lián)合使用則優(yōu)于單劑量、甚至二倍劑量的ATO或Cyclopamine，經(jīng)Chou's公式分析二者可顯著協(xié)同抑制PC3細(xì)胞生長。3.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步顯示ATO聯(lián)合Cyclopamine使用較單劑量組更能明顯抑制PC3細(xì)胞移植瘤的生長(p＜0.05)。4.Real-time PCR分析結(jié)果顯

6、示ATO聯(lián)合Cyclopamine使用較單劑量組更明顯下調(diào)Hh信號(hào)通路中GLI1蛋白mRNA的表達(dá)(p＜0.05)。5.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示，ATO聯(lián)合Cyclopamine使用具有輕微誘導(dǎo)凋亡作用，且較單劑量組能更明顯阻滯PC3細(xì)胞于S期(p＜0.01)。
　　結(jié)論:低劑量砷聯(lián)合Cyclopamine能協(xié)同抑制非雄激素依賴前列腺癌PC3細(xì)胞的生長，其機(jī)制與二者聯(lián)合使用可更明顯下調(diào)PC3細(xì)胞中Hh信號(hào)通路中GLI1蛋白、改變細(xì)胞