非小細胞肺癌分泌蛋白的定量研究.pdf

1、肺癌(lung cancer)是全世界發(fā)病率和死亡率最高的惡性腫瘤之一，非小細胞肺癌約占肺癌總數(shù)的80-85％，嚴重影響人們的生活質量。目前，關于這類疾病的發(fā)病機理仍然不清楚，其發(fā)生、發(fā)展的分子機理亟待闡明。近年來質譜技術發(fā)展迅速，為腫瘤研究提供了有力的研究手段。本實驗利用2D LC-MS/MS蛋白質組學平臺，結合同位素標記相對和絕對定量（isobaric Tags for Relative andAbsolute Quantitati

2、on，iTRAQ）技術以及SWATHTM(Sequential WindowedAcquisition of all Theoretical fragment ions，SWATHTM)非標記定量技術分析比較一對具有不同轉移潛能肺癌細胞系SPC-A-1 sci和SPC-A-1的差異分泌蛋白，篩選肺癌轉移相關分子。
　　第一部分:血清蛋白組分析方法的初步建立。利用安捷倫免疫親和色譜系統(tǒng)有效去除人血清中14個血清高豐度蛋白，有利于下一

3、步質譜鑒定出更多血清低豐度蛋白，為之后的實驗研究奠定基礎。去除高豐度蛋白后的血清，利用iTRAQ標記定量方法定量比較正常人與肺癌早期、中期及晚期病人的血清蛋白。
　　第二部分:NSCLC轉移相關分泌蛋白的定量分析。利用iTRAQ標記定量技術和SWATHTM非標記定量技術同時分析SPC-A-1sci和SPC-A-1的差異分泌蛋白，并分析、整合兩種方法的定量效果，結果顯示在兩種方法中重復鑒定與定量的蛋白有326個，差異表達的蛋白110

4、個，經(jīng)過生物信息數(shù)據(jù)庫軟件預測，有96％的蛋白可通過分泌途徑分泌。應用實時定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)與蛋白質印跡法(Western blot)檢測差異蛋白在基因與蛋白水平的表達情況，結果與質譜定量趨勢基本一致。
　　此外，運用第一部分中蛋白組學分析血清的方法，比較早期肺癌病人組（Ⅰ和Ⅱ期）和晚期肺癌病人組（Ⅲ和Ⅳ期）的血清差異蛋白，共鑒定差異蛋白71個。ELISA檢測質譜鑒定

5、結果中差異最顯著的蛋白(Complement C3)在血清樣本中的表達情況，結果與質譜分析一致。結合血清和分泌上清的差異表達數(shù)據(jù)結果，發(fā)現(xiàn)CD109同時在晚期肺癌病人和高轉移潛能肺癌細胞高表達，提示其可能與肺癌發(fā)生發(fā)展密切相關，具有潛在研究價值。
　　第三部分:CD109表達量檢測及生物功能的初步研究。qRT-PCR檢測CD109在72對肺癌病人癌和癌旁組織中的表達，顯示CD109在癌組織中顯著增高，且在低分化肺癌組織中高表達。E