Treg細(xì)胞及Tim3負(fù)性調(diào)控因子在異基因造血干細(xì)胞移植后作用的研究.pdf

1、目的:(1)通過對(duì)高危難治惡性血液病患者異基因造血干細(xì)胞移植后輸注DC-CIK細(xì)胞中 CD4+CD25+CD127-T(Treg)細(xì)胞的檢測(cè)及功能實(shí)驗(yàn),探討DC-CIK細(xì)胞輸注物中不同比例的Treg細(xì)胞與惡性血液病患者移植后急性移植物抗宿主病(aGVHD)、復(fù)發(fā)及生存的關(guān)系。
　　(2)通過檢測(cè)異基因造血干細(xì)胞移植后患者外周血中Treg細(xì)胞的比例及Tim3在淋巴細(xì)胞亞群上的表達(dá),探討Treg細(xì)胞、Tim3與aGVHD發(fā)生的關(guān)系。<

2、br>　　方法:(1)采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)高危難治惡性血液病患者在異基因造血干細(xì)胞移植后接受DC-CIK細(xì)胞治療的輸注物中Treg細(xì)胞百分比。
　　(2)與同期行異基因造血干細(xì)胞移植但未接受DC-CIK細(xì)胞治療的高危難治惡性血液病患者在aGVHD、復(fù)發(fā)及生存相比較。
　　(3)采用流式細(xì)胞儀分選出DC-CIK細(xì)胞中的Treg細(xì)胞,運(yùn)用混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)及MTT比色法,進(jìn)行DC-CIK細(xì)胞中Treg細(xì)胞體外抑制功能實(shí)驗(yàn)。
　

3、　(4)采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)異基因造血干細(xì)胞移植后發(fā)生aGVHD及未發(fā)生aGVHD患者外周血中Treg細(xì)胞的比例。
　　(5)采用流式細(xì)胞術(shù)的方法檢測(cè)異基因造血干細(xì)胞移植后發(fā)生aGVHD及未發(fā)生aGVHD患者外周血中Tim3在CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞、CD3-CD56+細(xì)胞及CD4+CD25+T細(xì)胞上的表達(dá)。
　　結(jié)果:(1)32例高危難治惡性血液病患者在異基因造血干細(xì)胞移植后接受DC-CIK細(xì)胞治療,25例患者輸注的D

4、C-CIK細(xì)胞來源為供體,7例為異基因造血干細(xì)胞移植后受體。
　　(2)Treg/DC-CIK細(xì)胞在5％以下的為低比例表達(dá)組,共10例;Treg/DC-CIK細(xì)胞在5％-10％之間的為中比例表達(dá)組,共16例;Treg/DC-CIK細(xì)胞在10％以上的為高比例表達(dá)組,共6例。
　　(3)DC-CIK細(xì)胞中的Treg細(xì)胞與效應(yīng)細(xì)胞的效靶比在1.3:1時(shí)抑制功能最強(qiáng)。
　　(4)異基因造血干細(xì)胞移植后接受DC-CIK細(xì)胞治療及

5、未接受DC-CIK細(xì)胞治療的高危難治惡性血液病患者從2010年12月隨訪至2013年7月1日,中位隨訪時(shí)間為13.7(2-19.7)個(gè)月。接受DC-CIK細(xì)胞治療的4/32例(12.50％)患者發(fā)生I-II度aGVHD,其中3例為低比例表達(dá)組,1例為中比例表達(dá)組;未接受DC-CIK細(xì)胞治療的10/27例(37.03％)患者發(fā)生aGVHD,其中7例發(fā)生I-II度aGVHD,3例發(fā)生III-IV度aGVHD,接受DC-CIK細(xì)胞治療的患者的

6、aGVHD的發(fā)生率及程度較未接受DC-CIK細(xì)胞的明顯降低(P<0.05);接受DC-CIK細(xì)胞治療的患者中7/32例(21.88％)復(fù)發(fā),1例為低比例表達(dá)組,3例為中比例表達(dá)組,2例為高比例表達(dá)組;未接受DC-CIK細(xì)胞治療的患者中8/27例(29.63％)復(fù)發(fā),兩組患者間的復(fù)發(fā)率無明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05);接受DC-CIK細(xì)胞治療及未接受DC-CIK細(xì)胞治療的患者的2年總生存率(OS)分別為70.31％VS52.37％(P<

7、0.05),2年無病生存率(DFS)分別為64.52％VS53.84％(P<0.05)。
　　(5)異基因造血干細(xì)胞移植后檢測(cè)患者外周血中Treg細(xì)胞比例顯示,aGVHD患者外周血中的Treg細(xì)胞較未發(fā)生aGVHD患者減低(P<0.05)。
　　(6)Tim3在異基因造血干細(xì)胞移植后淋巴細(xì)胞亞群表達(dá)檢測(cè)顯示, Tim3在aGVHD患者外周血CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞及CD4+CD25+T細(xì)胞上的表達(dá)均較未發(fā)生 aGVHD

8、患者升高(P<0.05);而Tim3在CD3-CD56+細(xì)胞上的表達(dá),兩組間無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。
　　結(jié)論:(1)DC-CIK細(xì)胞輸注物中Treg細(xì)胞具有免疫抑制效應(yīng),異基因造血干細(xì)胞移植后輸注DC-CIK細(xì)胞可以降低aGVHD的發(fā)生,卻未明顯影響移植物抗白血病(GVL)效應(yīng),從而有望提高高危難治白血病患者的治愈率,為造血干細(xì)胞移植后細(xì)胞生物干預(yù)治療提供了一條新的途徑。
　　(2)Treg細(xì)胞在異基因造血干細(xì)胞