(1,3)-β-D-葡聚糖檢測評價藥物治療真菌性角膜潰湯療效的實驗研究.pdf

1、目的:建立兔感染茄病鐮刀菌的真菌性角膜炎模型，監(jiān)測模型眼不同時期淚液中(1，3)-β-D-葡聚糖的濃度變化，結(jié)合病變角膜組織中菌絲負(fù)荷及角膜潰瘍臨床評分進行分析，討論(1，3)-β-D-葡聚糖檢測評價真菌性角膜炎動物模型的可行性;通過藥物治療真菌性角膜炎動物模型，觀察(1，3)-β-D-葡聚糖在真菌性角膜炎愈合過程中的濃度變化，進一步討論(1，3)-β-D-葡聚糖評價藥物治療真菌性角膜炎療效的應(yīng)用，為探索一種真菌性角膜炎無創(chuàng)篩查和定量評

2、價手段提供理論依據(jù)。
　　 方法:1.新西蘭大耳白兔32只，隨機選取16只為實驗組，16只為陰性對照組。實驗組采用角膜劃痕法接種標(biāo)準(zhǔn)茄病鐮刀菌株，制作真菌性角膜炎動物模型，陰性對照組接種生理鹽水。均為右眼接種，左眼為正常對照組。每日行裂隙燈顯微鏡檢查，于病程第3、7、15、21天進行臨床評分，并分別收集三組淚液10μL行(1，3)-β-D-葡聚糖濃度檢測。分別于上述各時間點隨機選取實驗組4只、陰性對照組4只經(jīng)耳緣靜脈栓塞處死后，

3、留取角膜組織行組織病理學(xué)檢查。觀察病情進展情況。
　　 2.新西蘭大耳白兔42只，按第一部分的方法，接種茄病鐮刀菌，均為右眼接種。從42只兔真菌性角膜炎模中挑選臨床評分接近的36只進行實驗，隨機分為治療組18只、對照組18只。治療組自成模后第1天即予5％那他霉素滴眼液點眼，對照組不予干預(yù)。分別于治療前，治療第3、5、10、15、21天收集患眼淚液行(1，3)-β-D-葡聚糖濃度檢測，并于上述相同時間點隨機選取治療組3只、對照組3

4、只處死后留取角膜組織，以角膜潰瘍?yōu)橹行姆肿鲀煞荩环菪薪M織病理學(xué)檢查，一份置于經(jīng)高壓消毒的EP管中用于MMP-9蛋白Western-blot檢測。觀察抗真菌藥物治療療效。
　　 結(jié)果:1.兔感染茄病鐮刀菌性角膜炎模型建立成功，成功率100％。病程第3、7、15、21天，實驗組淚液中(1，3)-β-D-葡聚糖濃度分別為(656.32±97.63) pg/mL、(858.29±96.26)pg/mL、(1047.49±105.36)

5、 pg/mL、(1679.47±124.42) pg/mL，而正常對照組和陰性對照組各時間點葡聚糖濃度全部穩(wěn)定于20pg/mL以下，顯著低于實驗組（F=69.05，P＜0.01）。從實驗組(1，3)-β-D-葡聚糖濃度的變化來看，隨著真菌性角膜炎病情的進展，(1，3)-β-D-葡聚糖濃度隨之升高，而角膜組織中真菌負(fù)荷未增高，甚至有減少趨勢。
　　 2.治療組治療第3、5、10、15、21天(1，3)-β-D-葡聚糖濃度分別為(4

6、38.38±79.58) pg/mL、(194.39±23.54) pg/mL、(106.54±19.87)(58.36±10.39) pg/mL，(16.27±3.42) pg/mL;而對照組在病程第3天時濃度為(554.56±92.26) pg/mL，隨后逐日升高，至21天時升至(1894.47±156.47) pg/mL，兩組間各檢測時間點濃度差異均有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（F=217.65，227.96，P＜0.01）。角膜組織中MMP

7、-9 Westernblot檢測結(jié)果顯示，治療前，兩組MMP-9蛋白均有表達，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（T=1.358，P＞0.05）;至治療15、21天，對照組蛋白表達量明顯增加，而治療組無升高，甚至開始下降，差異均有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(T=9.396,25.475，P＜0.01)。
　　 結(jié)論:1.淚液中(1，3)-β-D-葡聚糖濃度與真菌性角膜炎臨床評分有相關(guān)性，能夠定量評價角膜真菌感染的嚴(yán)重程度，較臨床評分等半定量評價手段更優(yōu);角膜