USP22和SIRT1蛋白在腎透明細胞癌中的表達及其作用.pdf

1、第一部分:USP22和SIRT1蛋白在腎透明細胞癌中的表達以及臨床意義
　　背景和目的:腎透明細胞癌為多基因異常相關腫瘤。USP22是近年來發(fā)現(xiàn)的腫瘤干細胞新標記蛋白，而且可能與腫瘤相關蛋白SIRT1具有相互作用，因此，我們研究腎透明細胞癌中USP22和SIRT1蛋白的表達情況以及它們與臨床病理之間的聯(lián)系，評判USP22和SIRT1在腎透明細胞癌發(fā)生發(fā)展中的作用。
　　方法:基因表達網(wǎng)站上分析USP22，SIRT1在腎透明細

2、胞癌中的表達情況，Western blot比較腎癌細胞株與正常腎細胞株中USP22，SIRT1蛋白的表達差異，利用我們院2006-2007年間的腎透明細胞癌標本制作組織芯片，采用免疫組織化學方法檢測USP22，SIRT1的亞細胞定位及其表達情況，結合臨床病理參數(shù)及電話隨訪的生存情況，分析USP22，SIRT1的表達及其臨床意義。
　　結果:
　　1、相較于正常腎組織及腎細胞系，USP22，SIRT1在腎透明細胞癌的人體標本和

3、腫瘤細胞系中表達較高。
　　2、成對的臨床樣本中顯示，腎透明細胞癌的發(fā)生伴隨著USP22，SIRT1高表達。
　　3、在腎透明細胞癌的病理標本中，共定位于細胞核的USP22，SIRT1的表達與患者的年齡（是否大于60歲），腫瘤浸潤深度，遠處轉移，臨床TNM分期，病理分級緊密相關。
　　4、總共可利用的376例臨床標本中，患者的隨訪率為64.36％(242/376)，其中，總存活201例（健康存活185例，腫瘤轉移16例

4、），死亡41例。獲訪的患者中TNM臨床分期的Ⅰ期68.2％(165/242)，Ⅱ期7.4％(18/242)，Ⅲ期19.8％(48/242)，Ⅳ期4.5％(11/242)?？?76例手術中有根治性腎切除手術308例（開放手術266例，腔鏡下42例），腎部分切除術58例（開放手術57例，腔鏡下1例），腎根治+靜脈切開取栓5例，腎根治切除術+腎上腺切除術3例，左腎根治+脾臟切除1例，右腎癌根治+右半結腸切除1例?；颊叩钠翊婊盥屎蜔o病生存率分

5、別為83.1％(201/242)，76.4％(185/242)，患者的5年存活率和無病生存率分別為83.5％(202/242)，76.9％(186/242)。
　　5、Log-rank單因素分析顯示患者的生存與患者年齡（是否大于60歲），腫瘤大?。ㄖ睆绞欠裥∮?cm），腫瘤浸潤深度，腫瘤是否有遠處轉移，腫瘤的TNM臨床分期，腫瘤分級，USP22和SIRT1的表達密切相關。
　　6、Cox多因素回歸分析則發(fā)現(xiàn)病理分級，USP2

6、2的表達和腫瘤的浸潤深度是腎透明細胞癌預后的獨立危險因素，而與患者生存相關的年齡，腫瘤大小，腫瘤浸潤深度，腫瘤的臨床TNM分期，SIRT1等則是非獨立的預后因素。
　　7、相關性分析顯示:在成對的46例標本中，無論是在正常組織還是在癌組織，USP22的表達都與SIRT1具有中度的相關性(r=0.586/0.711，p＜0.01)。而在總的376例樣本中，USP22與SIRT1也具有密切的相關性(r=0.379，p＜0.01)。

7、r>　　結論:共定位細胞核的USP22與SIRT1表達具有相關性，而且都與腎透明細胞癌惡性程度密切相關，暗示腎癌預后獨立危險因素USP22可能協(xié)同腎癌預后影響因素的SIRT1參與了腎透明細胞癌的發(fā)病過程。它們具有病程預測和作為治療分子靶點的潛在價值。
　　第二部分:USP22協(xié)同SIRT1參與腎透明細胞癌發(fā)病過程的分子機制
　　背景和目的:第一部分實驗證明了共定位于細胞核的USP22和SIRT1具有表達上的相關性，而且與腎透

8、明細胞癌臨床病理參數(shù)密切相關，它們協(xié)同參與了腎透明細胞癌的發(fā)病過程，在此，研究它們相關性的原因以及參與腫瘤發(fā)生的分子機理。
　　方法:構建含有USP22和SIRT1及其截短、失活突變體USP22C185S、SIRT1H363Y、shUSP22、shSIRT1的質(zhì)粒。轉染USP22和SIRT1后采用共聚焦免疫熒光顯色確定USP22，SIRT1的亞細胞定位，采用免疫共沉淀分析USP22與SIRT1之間的結合情況，蛋白水平上的修飾關系，

9、報告基因實驗探討修飾后對蛋白功能的影響?；虺聊琔SP22和SIRT1后分別采用CCK-8和流式細胞術判斷細胞增殖，凋亡情況，并利用western blot驗證其原因，研究USP22和SIRT1蛋白對腫瘤生長的影響。
　　結果:USP22，SIRT1，失活突變體USP22C185S，SIRT1H363Y以及USP22，SIRT1截短的編碼蛋白都定位于細胞核中。USP22與SIRT1具有相互作用，并且USP22可以對SIRT1進行去