盆底骨骼肌細胞受力前后的超微結(jié)構(gòu)變化.pdf

1、目的
　　應用Flexercell4000細胞加載系統(tǒng)對盆底骨骼肌細胞加載外力，闡明力加載實驗中加力時間和加力強度與細胞超微結(jié)構(gòu)損傷的關系及細胞凋亡情況，探討盆底骨骼肌細胞機械性損傷前后α-肌動蛋白（α-actin）基因表達水平的變化。
　　方法
　　首先取腹會陰聯(lián)合直腸癌根治術(shù)病人的盆底肛提肌組織，對其進行體外原代培養(yǎng)、純化和鑒定，取2-5代穩(wěn)定的傳代骨骼肌細胞，為后續(xù)加力實驗提供物質(zhì)基礎。然后采用Flexercel

2、l4000細胞加載系統(tǒng)對細胞加載外力，設置加力強度分別為0、3％和6%，加力時間分別為6小時和24小時。最后收集細胞，借助透射電子顯微鏡對加力前后骨骼肌細胞形態(tài)及其超微結(jié)構(gòu)變化作出定性描述；應用流式細胞技術(shù)檢測骨骼肌細胞加力前后細胞的凋亡情況；通過實時定量熒光PCR(RT-PCR)法來測定細胞受力前后α-肌動蛋白(α-actin)基因表達水平的變化。
　　結(jié)果
　　1.通過透射電鏡觀察發(fā)現(xiàn)，盆底骨骼肌細胞在加力的條件下，細胞

3、形態(tài)及其內(nèi)部超微結(jié)構(gòu)會發(fā)生一系列適應性改變或損傷性變化，隨著加力時間和加力強度的增加，細胞損傷性變化更明顯。在加力3%6h的條件下，與未加力組相比，細胞形態(tài)變化不大，隨著加力強度和加力時間的延長，細胞的形態(tài)逐漸破碎，排列方式紊亂，細胞膜結(jié)構(gòu)不清甚至消失，線粒體腫脹變圓，嵴變短甚至消失，細胞核內(nèi)陷、固縮，異染色質(zhì)增多，溶酶體增多。
　　2.流式細胞儀檢測結(jié)果顯示：加力組與未加力組相比，骨骼肌細胞的凋亡率增加。在加力時間固定的條件下，

4、加力強度6%下的細胞凋亡率比加力強度3%下的細胞凋亡率增加（F=44.742，P＜0.05），差異有統(tǒng)計學意義，表明隨著加力強度的增加，骨骼肌細胞凋亡率增加；在加力強度固定的條件下，加力時間為24小時的細胞凋亡率比加力時間為6小時的凋亡率增加（F=15.998，P＜0,05），差異有統(tǒng)計學意義，表明隨著加力時間的延長，細胞凋亡率增加。且加力時間和加力強度存在著交互作用（F=3.575，P＜0.05），在加力時間24小時和加力強度為6%的

5、條件下，細胞凋亡率增加最明顯。
　　3.RT-PCR法檢測結(jié)果示：加力組與未加力組相比，骨骼肌細胞的α-actinmRNA的表達水平下降，在加力時間固定的情況下，加力強度為6%的α-actinmRNA的表達水平比加力強度為3%的基因表達水平下降（F=90.743，P＜0.05），差異有統(tǒng)計學意義，表明隨著加力強度的增加，細胞的α-actinmRNA的表達水平隨著下降。在加力強度固定的情況下，加力時間為24小時的α-actinmRN

6、A的表達水平比加力時間為6小時的基因表達水平下降（F=23.151，P＜0.05），表明隨著加力時間的延長，細胞α-actinmRNA的表達水平隨著下降。且加力時間和加力強度存在著交互作用（F=12.908，P＜0.05），在加力時間24小時和加力強度6%的條件下，細胞的α-actinmRNA的表達水平下降最明顯。
　　結(jié)論
　　本實驗發(fā)現(xiàn)盆底肛提肌細胞受到機械拉伸刺激后，細胞形態(tài)、超微結(jié)構(gòu)及骨架蛋白基因表達水平發(fā)生一系列改