隱丹參酮抑制TNFα誘導內皮細胞LOX-1表達作用與機制研究.pdf

1、目的:丹參是常用的活血化瘀中藥,具有顯著的心血管保護活性,然其作用機制尚未明確。LOX-1是內皮細胞上ox-LDL的主要受體,在動脈粥樣硬化(Atherosclerosis, As)中起重要作用。本研究擬探討丹參中的主要活性成分之一的隱丹參酮(Cryptotans-hinone,CPT)對TNFα誘導人臍靜脈內皮細胞(Human umbilical vein endothelial cells, HUVECs) LOX-1表達作用及其可

2、能機制。
　　方法:體外培養(yǎng)人臍靜脈內皮細胞,以TNFα為工具藥物,MTT法測定TNFα對內皮細胞的毒性作用;Real-time RT-PCR測定TNFα誘導的LOX-1 mRNA表達,免疫印跡法檢測TNFα對LOX-1蛋白表達以及CPT的干預作用;熒光探針DCFH2-DA檢測細胞內活性氧(Reactive oxygen species,ROS)的生成;利用不同來源之ROS抑制劑鑒定ROS之可能來源;測定TNFα對信號通路蛋白NF

3、-κB p65、ERK磷酸化水平及CPT的干預作用;DiI-ox-LDL標記法檢測內皮細胞對ox-LDL的吞噬及CPT的干預作用;大鼠腹腔注射TNFα,測定CPT對主動脈上LOX-1蛋白表達及NF-κB p65、ERK磷酸化水平。
　　結果:10 ng/ml的TNFα對HUVECs無明顯的毒性作用;TNFα可劑量和時間依賴性的誘導LOX-1 mRNA和蛋白的表達;TNFα可誘導內皮細胞內活性氧的生成,這可被魚藤酮、DPI、乙酰半胱

4、氨酸(N-acetyl cysteine, NAC)所抑制;CPT可濃度依賴性的抑制 TNFα誘導的 ROS生成;CPT可濃度依賴性地抑制 TNFα誘導的內皮細胞LOX-1蛋白表達,抑制 TNFα誘導的內皮細胞 NF-κB-p65、ERK磷酸化水平;ROS抑制劑魚藤酮、DPI、ROS清除劑 NAC、NF-κB抑制劑 Bay11-7082、ERK抑制劑PD98059均可顯著抑制TNFα誘導LOX-1表達;CPT和NAC抑制TNFα誘導大鼠