苯扎貝特對(duì)ox-LDL誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的影響及LOX-1在其中的作用.pdf

1、目的：體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)，用氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)干預(yù)后內(nèi)皮細(xì)胞受損，觀察其對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡及血凝素樣氧化型低密度脂蛋白受體-1(LOX-1)表達(dá)的影響，研究過氧化物酶增生物激活受體α(PPARα)的配體苯扎貝特對(duì)ox-LDL作用后的內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的影響并探討其機(jī)制。 方法：無菌培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞，采用形態(tài)學(xué)及抗Ⅷ因子抗體免疫熒光染色進(jìn)行內(nèi)皮細(xì)胞鑒定。選擇生長良好的第4、5代細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)分為

2、6組：①對(duì)照組：DMEM培養(yǎng)基；②oX-LDL組：培養(yǎng)基中加入終濃度為50mg/L的ox-LDL孵育24h；③低濃度苯扎貝特組：培養(yǎng)基中加入濃度為50umol/L的苯扎貝特預(yù)處理2h后，再加入ox-LDL(終末濃度50mg/L)共同孵育24h；④中濃度苯扎貝特組：苯扎貝特濃度為100umol/L，余同低濃度苯扎貝特組；⑤高濃度苯扎貝特組：苯扎貝特濃度為200μmol/L，余同低濃度苯扎貝特組。⑥多聚肌苷酸250μg/mL+中濃度苯扎貝特

3、組：用250μg/mL多聚肌苷酸預(yù)處理2小時(shí)，余同中濃度苯扎貝特組。應(yīng)用RT-PCR和Wester-blot方法分別測(cè)定各組LOX-1基因和蛋白的表達(dá)；應(yīng)用流式細(xì)胞儀從數(shù)量上檢測(cè)細(xì)胞凋亡狀況；用RT-PCR和Wlester-blot方法分別測(cè)①-⑤組凋亡基因Bcl-2、Bax的表達(dá)； 結(jié)果： (1)正常細(xì)胞生長良好，倒置顯微鏡下觀察可見其呈鋪路石狀鑲嵌排列，細(xì)胞為扁平多角形，邊界清楚，胞漿豐富。人第Ⅷ因子相關(guān)抗原的SP免

4、疫組化細(xì)胞漿內(nèi)染有棕黃色的染色顆粒為陽性反應(yīng)，證實(shí)培養(yǎng)的細(xì)胞為內(nèi)皮細(xì)胞。 (2)正常對(duì)照組LOX-1(mRNA：0.17±0.10，蛋白：0.22±0.10)表達(dá)較低，用50mg/L，ox-LDL干預(yù)后LOX-1基因(0.90±0.15)和蛋白(0.91±0.06)表達(dá)較對(duì)照組明顯增加，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；用不同濃度的苯扎貝特干預(yù)后LOX-1基因和蛋白表達(dá)較ox-LDL組明顯下降(mRNA分別為：0.56±0.08，0

5、.37±0.15，0.25±0.14蛋白分別為：0.57±0.26，0.38±0.18，0.27±0.04)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，各組間比較亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。多聚肌苷酸250μg/mL+中濃度苯扎貝特組LOX-1表達(dá)(mRNA：0.27±0.13，蛋白：0.26±0.22)較中濃度苯扎貝特組進(jìn)一步減少(P<0.05)。 (3)ox-LDL組與正常對(duì)照組比較內(nèi)皮細(xì)胞早期凋亡率及晚期凋亡率均明顯增加(P<0.05)，抗凋亡基因

6、Bcl-2表達(dá)下降(P<0.05)，凋亡基因BaX表達(dá)增加(P<0.05)，使Bcl-2和BaX的比值下降(P<0.05)，苯扎貝特可干預(yù)ox-LDL對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的作用，使HUVECs早期凋亡率及晚期凋亡率均明顯減少(P<0.05)，Bcl-2表達(dá)增加(P<0.05)，BaX表達(dá)降低(P<0.05)，Bcl-2/Bax上調(diào)(P＜0.05)，且其作用成濃度效應(yīng)依賴關(guān)系。預(yù)先用LOX-1阻滯劑干預(yù)后細(xì)胞早期及晚期凋亡率較中濃度苯扎貝特組比較進(jìn)

7、一步減少(P＜0.05)，但較高濃度組苯扎貝特組比較無明顯差別(P＞0.05)。 結(jié)論： (1)ox-LDL可引起內(nèi)皮細(xì)胞LOX-1表達(dá)增加，起到損傷內(nèi)皮細(xì)胞的作用。 (2)苯扎貝特可以通過下調(diào)LOX-1 mRNA和蛋白的表達(dá)改善ox-LDL對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的損。 (3)ox-LDL可引起內(nèi)皮細(xì)胞凋亡增加，上調(diào)抗凋亡基因Bcl-2表達(dá)，下降凋亡基因Bax表達(dá)，使Bcl-2和Bax的比值下降，苯扎貝特可改善ox-