丹參中丹參酮Ⅰ和二氫丹參酮Ⅰ的抗腫瘤活性及作用機(jī)制研究.pdf

1、研究背景:丹參為唇形科植物丹參（Salvia miltiorrhizaBge.）的干燥根及根莖，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，是常用的活血化瘀中藥，已成為治療冠心病、心絞痛、心肌梗塞等心血管疾病的常用藥物，也是藥用植物研究的熱點(diǎn)。
　　目前，已經(jīng)知道的丹參的化學(xué)成分主要包括水溶性的丹參酚酸類成分如丹參酚酸B等以及脂溶性的丹參酮類成分如丹參酮Ⅰ、丹參酮ⅡA、二氫丹參酮Ⅰ、次丹參酮、隱丹參酮等，其中丹參酮為主要的抗腫瘤成分之一，它們通過抑制細(xì)

2、胞增殖、促進(jìn)細(xì)胞凋亡和分化來發(fā)揮抗腫瘤、抗癌的作用。本文就丹參酮的這一特點(diǎn)，來改進(jìn)和優(yōu)化丹參中丹參酮Ⅰ、二氫丹參酮Ⅰ的提取分離方法，探討丹參酮Ⅰ、二氫丹參酮Ⅰ的抗腫瘤活性，研究其抗腫瘤機(jī)制，為尋找生物活性更好的化合物開辟了新的途徑，同時(shí)也為丹參作為新型的抗腫瘤中藥提供了強(qiáng)有力的科學(xué)依據(jù)。
　　目的:采用傳統(tǒng)的植物化學(xué)分離技術(shù)從丹參中分離、純化并得到化合物丹參酮Ⅰ、二氫丹參酮Ⅰ。并通過MTT法篩選出丹參酮Ⅰ、二氫丹參酮Ⅰ的抗腫瘤活性

3、，初步確定丹參酮Ⅰ、二氫丹參酮Ⅰ起抑制作用的腫瘤細(xì)胞。通過細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)及實(shí)時(shí)定量RT-PCR法探討丹參酮Ⅰ對(duì)腫瘤基因表達(dá)的影響，推測(cè)其抑制機(jī)制。
　　方法:(1)丹參酮Ⅰ、二氫丹參酮Ⅰ的提取純化:通過硅膠柱，凝膠柱層析的分離方法對(duì)丹參80％甲醇大孔樹脂部位反復(fù)洗脫。
　　(2) MTT法檢測(cè)丹參酮Ⅰ、二氫丹參酮Ⅰ的抗腫瘤細(xì)胞增殖活性:人胃癌細(xì)胞MGC-803、乳腺癌細(xì)胞MCF-7接種于96孔板中，培養(yǎng)18小時(shí)后，給予三個(gè)不同

4、濃度的藥液，分別培養(yǎng)24、48、72小時(shí)后，加入適量的MTT溶液，測(cè)定不同濃度的藥物在不同時(shí)間下，其對(duì)腫瘤細(xì)胞抑制率作用的影響。
　　(3)流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期的改變以及凋亡情況:人胃癌細(xì)胞MGC-803接種于6孔板中，培養(yǎng)24小時(shí)，確定細(xì)胞凋亡的情況。
　　(4) RT-PCR方法對(duì)人胃癌細(xì)胞MGC-803的基因表達(dá)的影響:提取同一濃度不同時(shí)間段給藥細(xì)胞的RNA，將其逆轉(zhuǎn)錄成CDNA，擴(kuò)增、跑膠，確定基因的調(diào)節(jié)情況。

5、r>　　結(jié)果:(1)丹參酮Ⅰ、二氫丹參酮Ⅰ對(duì)人乳腺癌細(xì)胞MCF-7幾乎沒有生長(zhǎng)抑制作用，對(duì)人胃癌細(xì)胞MGC-803有很明顯的生長(zhǎng)抑制作用。
　　(2)丹參酮Ⅰ、二氫丹參酮Ⅰ能明顯阻滯人胃癌細(xì)胞MGC-803的細(xì)胞周期，使細(xì)胞核裂解呈現(xiàn)碎片狀而產(chǎn)生凋亡小體，且其凋亡率成明顯的上升趨勢(shì)。
　　(3)丹參酮Ⅰ通過下調(diào)bcl-2、cmyc或者上調(diào)p53、bax基因表達(dá)，抑制人胃癌細(xì)胞生長(zhǎng)，并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。
　　結(jié)論:丹參酮Ⅰ、