鉀離子通道阻滯劑4-AP對人舌鱗癌Tca8113細(xì)胞生長影響的研究.pdf

1、口腔頜面部最常見的惡性腫瘤之一就是舌鱗狀細(xì)胞癌(tonguesquamouscellcareinoma,TSCC),該病患者中男性比女性多見,由于舌體特殊的位置和其所擔(dān)任的重要功能,一旦受損,將給患者的生活生存質(zhì)量帶來極大的挑戰(zhàn)。目前,對于腫瘤的研究多集中于腫瘤標(biāo)記物和治療靶點(diǎn)的尋找。鉀通道(potassiumchannel)是細(xì)胞膜上一類分布最廣,類型最多的離子通道,其中的電壓門控型鉀通道(voltage-gatedK+channel

2、s,Kv)廣泛存在于興奮性和非興奮性細(xì)胞的細(xì)胞膜上,且參與了多種細(xì)胞的生理功能,對多種細(xì)胞的增殖、周期以及凋亡都有一定的影響。4-氨基吡啶(4-aminopyridine,4-AP)是一類電壓門控型鉀通道阻滯劑,可以選擇性的阻斷Kv通道。多項(xiàng)研究表明,4-AP可以抑制多種腫瘤細(xì)胞的增殖,誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,并參與細(xì)胞周期的調(diào)控。目的:本實(shí)驗(yàn)采用CCK-8法檢測4-AP對人舌鱗癌細(xì)胞株Tca8113細(xì)胞的增殖影響,流式細(xì)胞術(shù)檢測4-AP對人舌鱗

3、癌細(xì)胞周期的調(diào)控及細(xì)胞凋亡率的檢測,意在研究4-AP對人舌鱗癌Tca8113細(xì)胞生長的影響,探尋4-AP對該細(xì)胞生長影響的可能的機(jī)制,以期為人舌鱗癌的預(yù)防、診斷和治療提供可靠的理論依據(jù)。
　　方法:1.采用CCK-8法檢測濃度為1,5,10,20,50,100mmol/L的鉀離子通道阻滯劑4-AP分別作用于人舌鱗癌Tca8113細(xì)胞12h,24,48h后,酶標(biāo)儀檢測各組細(xì)胞的OD值,計(jì)算各濃度4-AP在不同時(shí)間對Tca8113細(xì)胞

4、的增殖抑制率;2.濃度為5,10,20,50mmol/L的4-AP干預(yù)人舌鱗癌Tca8113細(xì)胞24h后,70％酒精固定細(xì)胞12h,流式細(xì)胞術(shù)(Flowcytometry,FCM)檢測各組細(xì)胞周期;3.濃度為5,10,20,50mmol/L的4-AP作用于人舌鱗癌細(xì)胞24h后,AnnexinV-FITC和PI雙染,同樣采用流式細(xì)胞儀檢測各組細(xì)胞凋亡率改;4.所有資料采用SPSS19.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用()表示,各組間比較

5、采用單因素方差分析(one-wayANOVA),P<0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:1.倒置相差顯微鏡下觀察可見,隨著4-AP的濃度和干預(yù)時(shí)間的增加,Tca8113產(chǎn)生細(xì)胞體積減小,細(xì)胞固縮變圓,細(xì)胞染色質(zhì)凝集,細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)較多空泡等一系列細(xì)胞形態(tài)的改變。2.4-AP對人舌鱗癌Tca8113細(xì)胞的增殖有抑制作用,采用單因素方差分析(One-wayANOVA)顯示,當(dāng)濃度分別為1,5,10,20,50和100mmol/L的4-A

6、P干預(yù)Tca8113細(xì)胞培養(yǎng)12h后,細(xì)胞的增殖抑制率相對于陰性對照組分別為0.65%,1.48%,2.98%,6.43%,23.57%和47.26%,差異具有顯著性(P<0.01);當(dāng)干預(yù)細(xì)胞24h后,細(xì)胞增殖抑制率分別為0.76%,8.40%,10.64%,13.30%,36.95%和74.50%,差異具有顯著性(P<0.01);而當(dāng)藥物干預(yù)達(dá)到48h后,細(xì)胞增殖抑制率則分別為1.01%,6.69%,30.16%,72.45%,79

7、.33%和80.15%,差異具有顯著性(P<0.01)。對不同作用時(shí)間同一濃度4-AP對各組Tca8113細(xì)胞增殖抑制率做統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,結(jié)果顯示4-AP對人舌鱗癌Tca8113細(xì)胞的增殖抑制作用在各組間除了濃度為1mmol/L的濃度組(P>0.05)外均具有顯著性差異(P<0.01)。3.濃度為5,10,20,50mmol/L的4-AP作用于人舌鱗癌Tca8113細(xì)胞24h后,GO/G1期的細(xì)胞所占的比例由對照組的49.60%上升至71.

8、73%,具有顯著性差異(P<0.01);S期細(xì)胞所占的比例由對照組的40.97%降至17.03%,具有顯著性差異(P<0.01);以上結(jié)果提示4-AP阻滯Tca8113細(xì)胞于G0/G1期。4.流式細(xì)胞儀檢測濃度為5,10,20,50,100mmol/L的4-AP作用于人舌鱗癌Tca8113細(xì)胞24h后細(xì)胞凋亡率,結(jié)果顯示濃度為5,10,20,50mmol/L4-AP組細(xì)胞凋亡率分別為6.79%,6.34%,7.28%,7.39%,與對照

9、組的7.08%相比較,差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);濃度為100mmol/L組細(xì)胞肉眼可見大量漂浮細(xì)胞,僅存極少數(shù)貼壁細(xì)胞,細(xì)胞濃縮呈圓形,可見較多細(xì)胞碎片,流式細(xì)胞儀檢測其凋亡率為35.01%,明顯高于其他實(shí)驗(yàn)組,具有顯著性差異(P<0.01)。
　　結(jié)論:1.4-AP對人舌鱗癌Tca8113細(xì)胞的增殖有抑制作用,這種作用呈時(shí)間濃度依賴關(guān)系。2.4-AP對人舌鱗癌Tca8113細(xì)胞周期分布有影響,阻滯細(xì)胞于G0/G1期,4