利用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)分析研究地木耳中抗紫外成分【開題報告】

1、<p><b>　　畢業(yè)論文開題報告</b></p><p><b>　　生物工程</b></p><p>　　利用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)分析研究地木耳中抗紫外成分</p><p>　　一、選題的背景與意義：</p><p>　　地木耳是一種具有良好的食用、藥用和環(huán)境生態(tài)學(xué)價值的陸生藍(lán)藻。

2、由于野生資源限制及不同種質(zhì)差別，地木耳的人工培養(yǎng)技術(shù)遠(yuǎn)未完善。以寧波產(chǎn)野生地木耳為研究對象, 采用結(jié)合了色譜法高分離性和質(zhì)譜法高鑒別特點的液相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，分析研究其中的抗紫外成分。</p><p>　　目前國內(nèi)外對地木耳的化學(xué)成分、生物活性和開發(fā)利用等研究處于起步階段，對地木耳營養(yǎng)成分進(jìn)行了些研究，但是研究結(jié)果差別較大；對地木耳的化學(xué)成分未進(jìn)行系統(tǒng)研究，其活性成分及生物活性有待深人研究；有關(guān)化學(xué)成分的分離

3、純化、分析結(jié)構(gòu)鑒定、活性測定等研究不夠；地木耳功能食品、藥品的研究開發(fā)不足</p><p>　　地木耳營養(yǎng)豐富，富含人體必須的氨基酸，含多種微量元素和維生素。因此，地木耳已成為人們的席上珍饈，利用地木耳可以生產(chǎn)健康飲品、食品．同時地木耳也可人藥，對某些疾病有獨到的療效。地木耳中粗蛋白質(zhì)及糖含量中等，含有一定的營養(yǎng)成分，并含有多種的微量元素，尤其是元素鋅的含量較高．作為人和動物的食物制品，不僅可獲得蛋白質(zhì)的營養(yǎng)成分

4、，同時可補充微量元素鋅，是一種營養(yǎng)價值較高可供開發(fā)利用的藻類。因此，它是一種很有經(jīng)濟(jì)效益和理論價值的微生物。目前，已有越來越多的人把地木耳作為一種野生蔬菜進(jìn)行開發(fā)，其前景十分廣闊。</p><p>　　二、研究的基本內(nèi)容與擬解決的主要問題：</p><p>　　2.1研究的基本內(nèi)容：</p><p>　　2.1.1以寧波產(chǎn)野生地木耳為研究對象，探究適合地木耳的環(huán)境條

5、件并培養(yǎng)</p><p>　　2.1.2采用結(jié)合了色譜法高分離性和質(zhì)譜法高鑒別特點的液相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，分析研究其中的抗紫外成分</p><p>　　2.1.3開發(fā)適合研究地木耳性質(zhì)與營養(yǎng)含量的液質(zhì)方法</p><p>　　2.2擬出現(xiàn)的問題：</p><p>　　2.2.1培養(yǎng)方式的不恰當(dāng)導(dǎo)致抗紫外成分不明顯</p>&l

6、t;p>　　2.2.2提取方法的篩選</p><p>　　2.2.3液質(zhì)開發(fā)技術(shù)難題</p><p>　　三、地木耳的培養(yǎng)、分離以及條件</p><p>　　3.1培養(yǎng)（不同的培養(yǎng)方法）</p><p>　　3.1.1材料清洗與滅菌</p><p>　　選新鮮、質(zhì)感好的地木耳，除凈雜草和附著物，洗凈。移入超凈工作

7、臺，用75%的酒精浸泡40多秒鐘，再用消毒棉棒沾上10%的洗潔精全面擦洗，超純水沖洗多次，直至把洗潔精洗凈為止，再放入滅菌的培養(yǎng)液中漂洗三次。然后于紫外燈下照射20分鐘左右。</p><p>　　3.1.2光照、溫度條件的設(shè)置</p><p>　　利用最適培養(yǎng)基BG11，就光照和溫度對地木耳培養(yǎng)的影響進(jìn)行了研究。實驗中設(shè)置25μE m?2 s?1和50μE m?2 s?1兩組光照強度，每組

8、再分別設(shè)置25℃、30℃和35℃三個不同的溫度，培養(yǎng)過程中光暗周期是12h/12h。</p><p>　　3.1.3搖動對培養(yǎng)地木耳的影響</p><p>　　由于地木耳在液體培養(yǎng)中不宜長期生長，故本實驗設(shè)置搖動培養(yǎng)，觀察搖動與否對懸浮培養(yǎng)地木耳的時間限制。培養(yǎng)方法：用250mL的三角瓶裝液量200mL放于轉(zhuǎn)速為35r/min的搖床上培養(yǎng)，每瓶放入干燥地木耳0.25g，于25℃-25μE

9、m?2s?1 BG11-C培養(yǎng)液中培養(yǎng)。定期測定培養(yǎng)過程中培養(yǎng)液溶氧值的變化，測定周期是12h。</p><p>　　3.2提取 方法——萃取</p><p>　　聚集盡可能多的地木耳（1kg），曬干，用80乙醇水溶液加熱，回流3h過濾</p><p>　　重復(fù)提取，直至提取液無色，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，得到水溶性提取物</p><p>　　將其置

10、于分液漏斗，加入兩倍體積石油醚萃取，直至萃取液無色，收集石油醚萃取物</p><p>　　旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，得到石油醚相提取物</p><p>　　用兩倍體積乙酸乙酯對水溶性提取物萃取分離，直至萃取液無色</p><p>　　旋轉(zhuǎn)濃縮，得到乙酸乙酯提取物</p><p>　　所剩睡相旋轉(zhuǎn)濃縮，得到水溶性提取物</p><p>

11、<b>　　3.3色譜質(zhì)譜條件</b></p><p>　　C18色譜柱：Hypersil Gold（100×2.1 mm, 1.7 μm）；進(jìn)樣量10 μL， 柱溫30℃，流動相為0.1%三氟乙酸水溶液和乙腈，流速0.3 mL/min，洗脫梯度為：0-8min, 10%B-50%B; 8-15min, 50%B-80%B; 15-20min, 80%B-90%B; 20-25mi

12、n, 90%B-100%B。</p><p>　　采用電噴霧電離源正離子電離模式，霧化氣采用氮氣，噴霧電壓 2.8K V，鞘氣流量 30 L/min，輔助氣流量 10 L/min，離子傳輸毛細(xì)管溫度300 ℃，掃描采用選擇反應(yīng)監(jiān)測（SRM）模式。碰撞能量見表2，采集時間均為0.2 s，碰撞氣采用氬氣，碰撞氣壓力1.5 mTorr。Q1和Q3分辨率均設(shè)定為半峰寬 0.7Da。</p><p>

13、;<b>　　技術(shù)路線：</b></p><p><b>　　3.4液質(zhì)方法開發(fā)</b></p><p><b>　　分離 </b></p><p><b>　　定性</b></p><p>　　定量有紫外和質(zhì)譜法兩種，選用質(zhì)譜法（三重四極桿質(zhì)譜）<

14、/p><p>　　定量包括回收率，精密度，LOD,LOQ</p><p>　　選用LC-MS/MS法的MRM方式檢測地木耳中紫外線成分，靈敏度高,不須經(jīng)過復(fù)雜的富集萃取過程，實驗效率明顯提高。采用了LC分離技術(shù)，利用石油醚/乙酸已酯為流動相，采用三重四極桿質(zhì)譜的多離子反應(yīng)監(jiān)測（MRM）方式，經(jīng)碰撞能量優(yōu)化試驗，確定特征子離子，可獲得極高的檢測靈敏度，方法檢出定量限（LOQ）均低于1μg/L的限

15、量5倍以上，滿足了低含量樣品的檢測要求。方法學(xué)驗證表明，本方法精密度高，回收率穩(wěn)定。</p><p>　　四、研究的總體安排與進(jìn)度</p><p>　　2010.11-2010.12 畢業(yè)論文選題</p><p>　　2010.12.-2011.01 進(jìn)行文獻(xiàn)查閱和資料收集，制定具體研究計劃和試驗方案。 </p><p>　　2

16、011.01-2011.03 開題，進(jìn)行地木耳的采集與提取與檢測，</p><p>　　2011.03-2011.05 數(shù)據(jù)和材料整理、分析，完成2篇外文翻譯，論文撰寫</p><p>　　2011.05-2011.06 提交并答辯。</p><p><b>　　五、參考文獻(xiàn)</b></p><p>　

17、　[1] 尹顯貴. 液相色譜-質(zhì)譜/串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)及其在藥物分析中的應(yīng)用[J]. 天津藥學(xué),2000,13(3):51-54</p><p>　　[2] 吳紅京,張春擴(kuò),賴鐘雄等.高效液相色譜法測定龍眼胚芽中的細(xì)胞分裂素[J].福建分析實驗研究報告,2005,14(1):2096-2098 </p><p>　　[3] 秦 旸,徐友宣,楊樹民等. 液相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用在興奮劑檢測中的應(yīng)用及

18、進(jìn)展[J]. 色譜,2000,26(4): 431-436</p><p>　　[4] 鄧中洋,胡征宇,況琪軍等. 地木耳規(guī)模化培養(yǎng)的初步研究[J]. 武漢植物學(xué)研究2004,22(6):578-580</p><p>　　[5] 楊　方,陳國南. 高效液相色譜法同時檢測水產(chǎn)品中氯霉素、甲砜霉素與氟甲砜霉素殘留[J]. 福建分析測試,2005,14(1):2112-2113</p&g

19、t;<p>　　[6] 鄭天,屠春燕. 高效液相色譜法和液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)在食品工業(yè)上的應(yīng)用[J]. 南京工業(yè)大學(xué)學(xué)報,2007,26(1):99-105</p><p>　　[7] 張廣洲,馬玉貞. 液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)在體內(nèi)藥物分析中的應(yīng)用進(jìn)展[J]. 齊魯藥事,2006,25(4):236-237</p><p>　　[8] 姜艷艷,劉斌,石任兵等. 高效液相色譜

20、－質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)在天然產(chǎn)物分離鑒定中的應(yīng)用[J]. 藥品評價,2005,2(1):11-16</p><p>　　[9] 趙麗娟,周成旭,嚴(yán)小軍等. 地木耳人工培養(yǎng)最適光溫條件及功能性成分Scytonemin的變化[J]. 食品科學(xué)學(xué)報, 2011,32 (9):25-28</p><p>　　[10] 趙鵬,徐繼林, 亓一舟等. 幾種海洋甲殼動物20-羥基蛻皮酮液質(zhì)分析研究[J]

21、. 分析化學(xué),2011,1(4):13-15</p><p>　　[11] 范群艷,吳向陽,朱曉宦等. 地木耳的研究進(jìn)展[J]. 常熟理工學(xué)院學(xué)報,2001,21(4):55-57</p><p>　　[12] 盛家榮,范會欽,曾令輝等. 普通念珠藻的主要營養(yǎng)成分分析[J]. 廣西師院學(xué)報(自然科學(xué)版),1998, 12(4):68-70</p><p>　　[13

22、] 賀寶珍,李義先. 地木耳營養(yǎng)價值及其潛能研究[J]. 山西大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版),1991,4(1):15-17</p><p>　　[14] 胡良成,宋光泉. 地木耳營養(yǎng)品質(zhì)的研究初報[J]. 仲愷農(nóng)業(yè)技術(shù)學(xué)院學(xué)報,1998,11(2):67-69</p><p>　　[15] 苗影志,王維堅,田青等. 長白山地藻食品全天然地耳營養(yǎng)保健飲料的研制[J].食品科學(xué),1996(6):10

23、-13</p><p>　　[16] 李三相,李勃,左國防等.陸生藍(lán)藻地木耳中海藻糖研究初報[J].天水師范學(xué)院學(xué)報,2004,12(5):05-07</p><p>　　[17] 范群艷,吳向陽,仰榴青等. 響應(yīng)面分析法優(yōu)化地木耳多糖提取工藝的研究[J]. 江蘇大學(xué)學(xué)報, 2004,17(3):237-242</p><p>　　[18] Exei Ploutno

24、 ,Raymond and Beverly Sackler et al. Nostocyclyne A, a Novel Antimicrobial Cyclophane from the Cyanobacterium Nostoc [J]. Nat Prod. 2000, 63, (3):1524-1526</p><p>　　[19] Jaki,Vogler,Sticher, et al.Novel Extr

25、acellular Diterpenoids with Biological Activity from the Cyanobacterium Nostoc commune [J]. Nat Prod. 2000,63,(3):339-343</p><p>　　[20] Charles Cockell,John Knowland. Ultraviolet radiation screening compound

26、s[J]. Biol, 1999,74(2):311-345</p><p>　　[21] Angela H, Brendan J. A critical assessment of the analysis and distributions of scytonemin and related UV screening pigments in sediments[J]. Organic Geochemistry