液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用測(cè)定抗風(fēng)濕類中藥中非法添加化學(xué)藥物成分

1、<p>　　液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用測(cè)定抗風(fēng)濕類中藥中非法添加化學(xué)藥物成分</p><p>　　【摘要】 目的建立快速、準(zhǔn)確、高靈敏度的測(cè)定抗風(fēng)濕類中藥制劑中非法添加阿司匹林、氨基比林、布洛芬、雙氯芬酸鈉、吲哚美辛分析方法。方法采用HPLC-DAD、UPLC/MS/MS法對(duì)非法摻入的化學(xué)藥物進(jìn)行定性鑒別，并以HPLC測(cè)定含量。結(jié)果受試制劑中檢測(cè)到摻有氨基比林、布洛芬、雙氯芬酸鈉、吲哚美辛。結(jié)論此方法靈敏準(zhǔn)確

2、，可作為抗風(fēng)濕類中藥制劑中非法添加阿司匹林、氨基比林、布洛芬、雙氯芬酸鈉、吲哚美辛的有效檢測(cè)方法。 </p><p>　　【關(guān)鍵詞】 高效液相色譜儀; 超高效液質(zhì)聯(lián)用儀; 抗風(fēng)濕類制劑; 阿司匹林; 氨基比林; 布洛芬; 雙氯芬酸鈉; 吲哚美辛</p><p>　　風(fēng)濕性及類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎是常見病、多發(fā)病，而抗風(fēng)濕類中藥多數(shù)顯效慢，需長(zhǎng)期服用，但安全性高。解熱鎮(zhèn)痛抗炎藥亦稱非甾體抗炎藥，其

3、中除苯胺類藥物外，絕大多數(shù)藥物兼有抗風(fēng)濕作用，此外糖皮質(zhì)激素類亦具有抗風(fēng)濕及類風(fēng)濕作用。這些西藥的共同特點(diǎn)是療效迅速，長(zhǎng)期服用副作用大。患者希望服用副作用小，見效有快的藥品，造假者為迎合患者的這一需求，在中成藥中非法添加解熱鎮(zhèn)痛抗炎類或糖皮質(zhì)激素類西藥。若患者在毫不知情的情況下長(zhǎng)期、大量服用這種所謂的純中藥制劑，勢(shì)必造成身體健康的損傷。為有效打擊此種制假摻偽的不法行為，保證臨床用藥安全，本文參考有關(guān)文獻(xiàn)[1～5]，研究建立了測(cè)定阿司匹林

4、、氨基比林、布洛芬、雙氯芬酸鈉、吲哚美辛的檢驗(yàn)方法，通過HPLC-DAD、UPLC/MS/MS確認(rèn)，可快速準(zhǔn)確地判斷中藥制劑中是否非法摻入上述化學(xué)藥物，可供藥監(jiān)、藥檢部門開展工作時(shí)參考。</p><p><b>　　1 儀器與試藥</b></p><p>　　Agilent 1100高效液相色譜儀，沃特世(Waters)ACQUITY UPLC Quattro Mic

5、roTM超高效液相色譜串聯(lián)三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀，MassLynxTM 4.1質(zhì)譜工作站軟件;AL204型電子天平(Mettler Toledo)。UP超純水制備系統(tǒng)。流動(dòng)相所用甲醇、乙腈為色譜純，水為超純水，其余所用試劑為分析純。阿司匹林、氨基比林、布洛芬、雙氯芬酸鈉、吲哚美辛對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，抗風(fēng)濕類中藥樣品為市場(chǎng)監(jiān)督抽樣。</p><p><b>　　2 方法與結(jié)果</b&g

6、t;</p><p>　　2.1 色譜條件色譜柱為Watres Sunfire C18(4.6 mm×150 mm, 5 μm);以乙腈為流動(dòng)相(A)，以0.02 mol/L NH4Ac-0.05%HAc溶液為流動(dòng)相(B)，按下表中的規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫;檢測(cè)波長(zhǎng)230 nm;體積流量1.0 ml/min;進(jìn)樣量10 μl，柱溫30℃;理論板數(shù)按5個(gè)峰計(jì)均不低于3 000;分離度應(yīng)大于3。梯度洗脫表見表1。

7、</p><p><b>　　表1 梯度洗脫</b></p><p>　　時(shí)間t/min流動(dòng)相A(%)流動(dòng)相B(%)0109086040203070</p><p>　　2.2 質(zhì)譜條件電噴霧電離源(ESI)，毛細(xì)管電壓3.5 kV，孔電30 V，萃取電壓2.0 V，透鏡電壓1.0 V;源溫120℃，脫溶劑溫度350℃;脫溶劑氣體流速500 L

8、/h，孔氣體流速50 L/h，正、負(fù)離子同時(shí)檢測(cè)，掃描方式采用全掃描一級(jí)質(zhì)譜、全掃描二級(jí)質(zhì)譜(MS/MS)，質(zhì)量采集范圍100～500。</p><p>　　2.3 對(duì)照品溶液的制備精密稱取阿司匹林、布洛芬對(duì)照品各60 mg，氨基比林、雙氯芬酸鈉、吲哚美辛對(duì)照品各20 mg置同一個(gè)100 ml量瓶中，加甲醇至刻度，超聲處理10 min,搖勻，作為對(duì)照品貯備溶液，精密量取對(duì)照品貯備溶液1 ml置10 ml容量瓶中，

9、加甲醇至刻度，搖勻，即得。</p><p>　　2.4 供試品溶液的制備若供試品為片劑或丸劑，應(yīng)細(xì)致研磨粉碎，稱取約0.3 g，置具塞錐形瓶中,精密加入甲醇50 ml,稱重,超聲處理20 min,放冷,用甲醇補(bǔ)足減失重量;若供試品為膠囊，取出內(nèi)容物,細(xì)致研磨粉碎，稱取約0.3 g，置具塞錐形瓶中,精密加入甲醇50 ml，稱重,超聲處理20 min,放冷,用甲醇補(bǔ)足減失重量;若供試品為液體，量取5 ml于50 ml

10、容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻。取上述樣品溶液適量，用0.45 μm濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。</p><p>　　2.5 線性關(guān)系考察精密稱取阿司匹林61.47 mg，布洛芬38.41 mg，氨基比林20.25 mg,雙氯芬酸鈉20.07 mg,吲哚美辛20.09 mg置100 ml 量瓶中，加甲醇至刻度，超聲處理10 min,搖勻，作為對(duì)照品儲(chǔ)備溶液，精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備溶液適量稀釋成系列濃度的溶液，作為對(duì)照品溶

11、液，分別精密吸取系列對(duì)照品溶液10 μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。見表2。</p><p>　　表2 對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)曲線</p><p>　　對(duì)照品回歸方程r線性范圍/μg·ml-1阿司匹林Y=2.92e+004X + 1.35e+0050.995 630.735～307.35氨基比林Y=9.00e+003 X - 2.45e+0020.999 810.125～101.25布洛芬

12、Y=5.20e+004 X + 1.10e+0040.999 519.205～192.05雙氯芬酸鈉Y=1.83e+004 X + 5.57e+0030.999 610.35～100.35吲哚美辛Y=1.82e+004 X + 5.24e+0030.999 510.45～100.45</p><p>　　2.6 回收率實(shí)驗(yàn)取抗風(fēng)濕中藥樣品0.15 g，各6份，精密稱定,置25 ml量瓶中,分別加上述對(duì)照儲(chǔ)備溶液6

13、,7.5,9 ml分別加甲醇至刻度,超聲處理20 min,放冷,搖勻,濾過, 進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算加樣回收率，阿司匹林、氨基比林、布洛芬、雙氯芬酸鈉、吲哚美辛的平均回收率分別為94.25%，99.67%，95.31%，97.68%，98.09%，RSD分別為3.12%，1.45%，1.99%，1.19%，1.38%。</p><p>　　2.7 檢測(cè)限取“2.5”項(xiàng)下低濃度混合對(duì)照品溶液，逐漸稀釋，依法測(cè)定，當(dāng)信噪比(

14、S/N)為3時(shí)，阿司匹林、氨基比林、布洛芬、雙氯芬酸鈉、吲哚美辛檢測(cè)限分別為91 ng，252 ng，1.056μg，558 ng，1.092 μg。</p><p>　　2.8 樣品測(cè)定經(jīng)對(duì)多批次對(duì)抗風(fēng)濕類中藥制劑進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果在風(fēng)濕靈膠囊、風(fēng)痛寧片及某私人診所配制的抗風(fēng)濕制劑供試品溶液的液相色譜中呈現(xiàn)與對(duì)照品色譜圖保留時(shí)間有相一致的色譜峰，同時(shí)對(duì)與對(duì)照品色譜保留時(shí)間一致的色譜峰，利用DAD分析紫外光譜圖，結(jié)果

15、光譜圖也與對(duì)照品一致，對(duì)檢測(cè)到的成分進(jìn)行了定量，結(jié)果是：風(fēng)濕靈膠囊含布洛芬2.08%、雙氯芬酸鈉1.94%、吲哚美辛1.05%;風(fēng)痛寧片含雙氯芬酸鈉1.27%;某私人診所配制的抗風(fēng)濕制劑含氨基比林0.89%。對(duì)照品色譜圖及UV光譜圖見圖1～2。</p><p>　　2.9 質(zhì)譜確證為保證檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確無誤，對(duì)可疑陽(yáng)性樣品進(jìn)行了質(zhì)譜確證，供試品中在與氨基比林、布洛芬、雙氯芬酸鈉、吲哚美辛對(duì)照品色譜保留時(shí)間及光譜圖都相

16、一致的樣品進(jìn)行質(zhì)譜分析，結(jié)果供試品中一級(jí)質(zhì)譜分子離子峰及二級(jí)質(zhì)譜主要碎片離子都與對(duì)照品的一級(jí)質(zhì)譜分子離子峰及二級(jí)質(zhì)譜主要碎片離子相一致，即氨基比林(232.1、159.1、113.1)、布洛芬(205.2、161.2)、雙氯芬酸鈉( 294.0、250.0、214.0)、吲哚美辛(356.0;312.1、297.1、270.1)。對(duì)照品質(zhì)譜圖見圖3。</p><p><b>　　圖3 對(duì)照品質(zhì)譜圖<

17、;/b></p><p><b>　　3 結(jié)論</b></p><p>　　由于中藥組分的復(fù)雜性，所以有必要采用高選擇性的分析手段。本法可快速、準(zhǔn)確地對(duì)中藥制劑中非法添加阿司匹林、氨基比林、布洛芬、雙氯芬酸鈉、吲哚美辛同時(shí)進(jìn)行檢測(cè)，專屬性強(qiáng)，5種化學(xué)藥物可達(dá)基線分離。本法同時(shí)提供對(duì)照品和樣品分子離子峰、二級(jí)質(zhì)譜碎片和液相色譜保留時(shí)間及UV光譜信息，對(duì)化學(xué)物質(zhì)達(dá)到

18、準(zhǔn)確定性、定量檢測(cè)，先進(jìn)可行，可作為抗風(fēng)濕類中藥制劑中質(zhì)量和安全用藥的控制。</p><p><b>　　【參考文獻(xiàn)】</b></p><p>　　[1] 劉起中，李慧義，杭太俊.中藥制劑中非法摻入化學(xué)藥物成分的測(cè)定[J].中國(guó)藥師，2007，10(8)：735.</p><p>　　[2] 王連水，姜建國(guó)，張西如，等. 液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法檢

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