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文檔簡介
1、目的:研究Hedgehog(Hh)信號通路相關因子在舌癌細胞株TCA中的表達,探討其對TCA細胞株增殖和遷移的影響。
方法:本研究用Hh信號通路抑制劑Cyclopamine處理TCA細胞后,采用MTT和劃痕實驗來檢測細胞抑制率和遷移能力,利用RT-PCR法和Western-Blot方法檢測Hh信號通路相關因子mRNA和蛋白表達。
結果:MTT結果顯示Cyclopamine對TCA細胞有抑制作用,且具有濃度依賴性。細胞
2、劃痕實驗結果顯示,在對照組中劃痕間距隨著時間的增加而減小,而Cyclopamine藥物組的愈合時間較長。加藥24h后RT-PCR結果顯示,Ptch基因在Cyclopamine藥物組中的表達低于對照組,20μM Cyclopamine和10μM Cyclopamine藥物組中表達明顯低于5μM Cyclopamine藥物組。Smo基因在藥物組中的表達低于對照組,且隨著藥物組濃度增高表達降低。加藥48h后結果顯示,Ptch基因在Cyclop
3、amine藥物組中的表達低于對照組。Smo基因在藥物組中的表達低于對照組,且隨著藥物組濃度增高表達降低。Gli1基因在對照組中的表達高于藥物組。加藥后72h結果Ptch基因在Cyclopamine藥物組中的表達低于對照組,在各藥物組間無明顯差異。
加Cyclopamine24h后Western Blot結果顯示,Ptch蛋白在藥物組中的表達低于對照組,隨著濃度的增高表達降低。Smo蛋白在藥物組中的表達低于對照組,10μM Cy
4、clopamine藥物組表達低于20μM Cyclopamine藥物組。48h結果顯示Ptch蛋白和Smo蛋白在Cyclopamine藥物組中的表達低于對照組,10μM Cyclopamine藥物組中的表達高于其他 Cyclopamine藥物組。72h結果顯示Smo蛋白在Cyclopamine藥物組中的表達低于對照組,隨著濃度增高蛋白表達降低。
結論:Hh信號通路特異性抑制劑Cyclopamine可以抑制TCA的生長,并可能降
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