轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白在肝癌中的表達及其意義.pdf

1、研究目的 分析人體肝細胞癌組織和癌旁肝組織中骨橋蛋白(osteopontin，OPN)和CD44V6蛋白、β-連環(huán)素(β-catenin)和上皮鈣黏連素(E-cadherin)的表達特征，探討以上蛋白的表達與肝癌臨床病理因素，特別是轉(zhuǎn)移之間的相關(guān)性。 研究方法 以臨床手術(shù)切除的原發(fā)性肝細胞癌和癌旁肝組織作為研究材料。應(yīng)用光學顯微鏡、免疫組織化學、核酸原位分子雜交、細胞圖像分析和免疫電鏡等實驗手段，系統(tǒng)地觀察了多種

2、蛋白質(zhì)包括OPN、CD44V6、β-catenin和E-cadherin在原發(fā)性肝細胞癌及其癌旁肝組織中的表達狀況，并分析它們與肝細胞癌組織分級、分型和門靜脈有無癌栓等臨床病理因素之間的相關(guān)性。 結(jié)果 一、免疫組織化學染色結(jié)果 1、OPN和CD44V6在肝細胞癌及癌旁肝組織中的表達 ①OPN陽性染色在肝癌中主要定位于癌細胞胞質(zhì)，為胞質(zhì)內(nèi)的棕黃色顆粒。未見胞核或胞膜著色。本組肝癌中共有28例OPN表達陽性，

3、陽性表達率為93.3％(28/30)。在癌結(jié)節(jié)周邊和一些離散的癌細胞胞質(zhì)內(nèi)，OPN往往呈強陽性表達。14例肝癌中還可觀察到浸潤在肝癌組織中的炎性細胞也呈陽性表達，表達部位在胞漿，有的甚至強于癌細胞中的表達。在癌旁肝組織中也可見OPN在胞漿中的陽性表達，陽性率為96.67％(29/30)。經(jīng)統(tǒng)計學分析，兩組的陽性表達強度存在差異，即肝癌組的平均光密度高于癌旁肝組織組(因透明細胞型肝癌的癌細胞胞漿空亮，難以判定表達情況，故除去此型)，差異有

4、顯著性(P＜0.05)。但兩組的陽性表達率差異無顯著性(P＞0.05)。 ②CD44V6在肝癌組織中的陽性染色主要定位于癌細胞胞質(zhì)，表現(xiàn)為棕黃色顆粒。30例肝癌組織中共有18例有陽性表達，陽性表達率為60％。而癌旁肝組織中同樣發(fā)現(xiàn)有CD44V6蛋白的陽性表達，部位也在胞漿，陽性表達率為70％(21/30)。經(jīng)統(tǒng)計學分析，兩組的陽性表達強度存在顯著差異：即肝癌組平均光密度高于癌旁肝組織組(P＜0.05)。但兩組的陽性表達率差異無顯

5、著性(P＞0.05)。③OPN和CD44V6的表達與肝細胞癌(hepatocellularcarcinoma，HCC)臨床病理因素之間的關(guān)系：OPN和CD44V6在不同的組織分級組和病理類型組的表達強度(平均光密度)都有顯著性差異(P值均小于0.05)，兩者均在梁索型中的表達強度最高，且伴有門靜脈癌栓組中的平均光密度顯著高于不伴門靜脈癌栓組(P＜0.05)。在不同組織學類型組和有無門靜脈癌栓組中，隨著OPN平均光密度的升高，CD44V6

6、的平均光密度亦上升，兩者的表達呈正相關(guān)(P＜0.05)。 2、β-catenin和E-cadherin在肝細胞癌及癌旁肝組織中的表達 ①在癌旁肝組織中，β-catenin蛋白的陽性表達主要定位于肝細胞膜，呈棕黃色的線性染色，尤其是細胞連接處，部分在近胞膜的胞漿處也可見棕黃色顆粒狀的陽性表達，未見胞核著色。30例癌旁肝組織中共有25例β-catenin表達陽性，陽性率為83.33％(25/30)。而在肝癌組織中，β-cat

7、enin蛋白的胞膜表達出現(xiàn)不同程度的缺失，而胞漿表達明顯增多，尤其是靠近胞核處，往往可見呈棕黃色粗顆粒狀的強陽性表達，甚至可見核表達。在肝癌組中有24例β-catenin蛋白表達陽性，陽性率為80％(24/30)。經(jīng)統(tǒng)計學分析，β-catenin蛋白的陽性表達強度存在組間差異，即肝癌組的平均光密度高于癌旁肝組織組，差異有顯著性意義(P＜0.05)。但兩組的陽性表達率無顯著性差異(P＞0.05)。 ②在30例癌旁肝組織中，有26例

8、強陽性表達E-cadherin，陽性率為86.67％(26/30)，主要為癌旁肝細胞膜上棕黃色線性著色，尤其是細胞連接處，少見細胞漿或胞核著色。而在30例癌組織中，只有10例可發(fā)現(xiàn)少量胞膜的陽性表達，陽性表達率為33.33％(10/30)。經(jīng)統(tǒng)計學分析，E-cadherin蛋白的陽性率和表達強度均顯示組間差異，即癌旁肝組織組高于肝癌組，差異有顯著性意義(P值均小于0.05)。 ③β-catenin和E-cadherin的表達與有

9、無門靜脈癌栓之間的關(guān)系：β-catenin在有門靜脈癌栓組中的平均光密度高于無門靜脈癌栓組，差異有顯著性意義，而E-cadherin則相反(P值均小于0.05)。 二、OPN在原發(fā)性肝細胞癌組織中的亞細胞定位 免疫電鏡結(jié)果表明：OPN蛋白陽性的膠體金顆粒主要定位于肝癌細胞的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，其他部位和癌旁肝組織組中僅有極少量膠體金顆粒散在分布。本組免疫電鏡的超薄切片上未發(fā)現(xiàn)炎性細胞內(nèi)有OPN蛋白陽性的膠體金顆粒。 三、

10、原位分子雜交結(jié)果 E-cadherin的mRNA陽性表達定位于癌旁肝細胞漿內(nèi)，呈紫藍色，癌細胞內(nèi)為陰性或極弱表達。其陽性率和表達強度均顯示組間差異，即癌旁肝組織組高于肝癌組，差異均有顯著性意義(P值均小于0.05)。 結(jié)論 1.OPN在肝癌組織中呈過表達狀態(tài)，其主要在肝癌細胞的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上合成，與門靜脈內(nèi)有無癌栓等臨床病理因素有關(guān)，并與CD44V6的表達呈正相關(guān)。因此，OPN可能通過CD44V6在肝癌轉(zhuǎn)移過程中起