轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白在肝癌中的表達(dá)及其意義.pdf

1、研究目的 分析人體肝細(xì)胞癌組織和癌旁肝組織中骨橋蛋白(osteopontin，OPN)和CD44V6蛋白、β-連環(huán)素(β-catenin)和上皮鈣黏連素(E-cadherin)的表達(dá)特征，探討以上蛋白的表達(dá)與肝癌臨床病理因素，特別是轉(zhuǎn)移之間的相關(guān)性。 研究方法 以臨床手術(shù)切除的原發(fā)性肝細(xì)胞癌和癌旁肝組織作為研究材料。應(yīng)用光學(xué)顯微鏡、免疫組織化學(xué)、核酸原位分子雜交、細(xì)胞圖像分析和免疫電鏡等實(shí)驗(yàn)手段，系統(tǒng)地觀察了多種

2、蛋白質(zhì)包括OPN、CD44V6、β-catenin和E-cadherin在原發(fā)性肝細(xì)胞癌及其癌旁肝組織中的表達(dá)狀況，并分析它們與肝細(xì)胞癌組織分級(jí)、分型和門靜脈有無癌栓等臨床病理因素之間的相關(guān)性。 結(jié)果 一、免疫組織化學(xué)染色結(jié)果 1、OPN和CD44V6在肝細(xì)胞癌及癌旁肝組織中的表達(dá) ①OPN陽性染色在肝癌中主要定位于癌細(xì)胞胞質(zhì)，為胞質(zhì)內(nèi)的棕黃色顆粒。未見胞核或胞膜著色。本組肝癌中共有28例OPN表達(dá)陽性，

3、陽性表達(dá)率為93.3％(28/30)。在癌結(jié)節(jié)周邊和一些離散的癌細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)，OPN往往呈強(qiáng)陽性表達(dá)。14例肝癌中還可觀察到浸潤在肝癌組織中的炎性細(xì)胞也呈陽性表達(dá)，表達(dá)部位在胞漿，有的甚至強(qiáng)于癌細(xì)胞中的表達(dá)。在癌旁肝組織中也可見OPN在胞漿中的陽性表達(dá)，陽性率為96.67％(29/30)。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，兩組的陽性表達(dá)強(qiáng)度存在差異，即肝癌組的平均光密度高于癌旁肝組織組(因透明細(xì)胞型肝癌的癌細(xì)胞胞漿空亮，難以判定表達(dá)情況，故除去此型)，差異有

4、顯著性(P＜0.05)。但兩組的陽性表達(dá)率差異無顯著性(P＞0.05)。 ②CD44V6在肝癌組織中的陽性染色主要定位于癌細(xì)胞胞質(zhì)，表現(xiàn)為棕黃色顆粒。30例肝癌組織中共有18例有陽性表達(dá)，陽性表達(dá)率為60％。而癌旁肝組織中同樣發(fā)現(xiàn)有CD44V6蛋白的陽性表達(dá)，部位也在胞漿，陽性表達(dá)率為70％(21/30)。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，兩組的陽性表達(dá)強(qiáng)度存在顯著差異：即肝癌組平均光密度高于癌旁肝組織組(P＜0.05)。但兩組的陽性表達(dá)率差異無顯

5、著性(P＞0.05)。③OPN和CD44V6的表達(dá)與肝細(xì)胞癌(hepatocellularcarcinoma，HCC)臨床病理因素之間的關(guān)系：OPN和CD44V6在不同的組織分級(jí)組和病理類型組的表達(dá)強(qiáng)度(平均光密度)都有顯著性差異(P值均小于0.05)，兩者均在梁索型中的表達(dá)強(qiáng)度最高，且伴有門靜脈癌栓組中的平均光密度顯著高于不伴門靜脈癌栓組(P＜0.05)。在不同組織學(xué)類型組和有無門靜脈癌栓組中，隨著OPN平均光密度的升高，CD44V6

6、的平均光密度亦上升，兩者的表達(dá)呈正相關(guān)(P＜0.05)。 2、β-catenin和E-cadherin在肝細(xì)胞癌及癌旁肝組織中的表達(dá) ①在癌旁肝組織中，β-catenin蛋白的陽性表達(dá)主要定位于肝細(xì)胞膜，呈棕黃色的線性染色，尤其是細(xì)胞連接處，部分在近胞膜的胞漿處也可見棕黃色顆粒狀的陽性表達(dá)，未見胞核著色。30例癌旁肝組織中共有25例β-catenin表達(dá)陽性，陽性率為83.33％(25/30)。而在肝癌組織中，β-cat

7、enin蛋白的胞膜表達(dá)出現(xiàn)不同程度的缺失，而胞漿表達(dá)明顯增多，尤其是靠近胞核處，往往可見呈棕黃色粗顆粒狀的強(qiáng)陽性表達(dá)，甚至可見核表達(dá)。在肝癌組中有24例β-catenin蛋白表達(dá)陽性，陽性率為80％(24/30)。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，β-catenin蛋白的陽性表達(dá)強(qiáng)度存在組間差異，即肝癌組的平均光密度高于癌旁肝組織組，差異有顯著性意義(P＜0.05)。但兩組的陽性表達(dá)率無顯著性差異(P＞0.05)。 ②在30例癌旁肝組織中，有26例

8、強(qiáng)陽性表達(dá)E-cadherin，陽性率為86.67％(26/30)，主要為癌旁肝細(xì)胞膜上棕黃色線性著色，尤其是細(xì)胞連接處，少見細(xì)胞漿或胞核著色。而在30例癌組織中，只有10例可發(fā)現(xiàn)少量胞膜的陽性表達(dá)，陽性表達(dá)率為33.33％(10/30)。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，E-cadherin蛋白的陽性率和表達(dá)強(qiáng)度均顯示組間差異，即癌旁肝組織組高于肝癌組，差異有顯著性意義(P值均小于0.05)。 ③β-catenin和E-cadherin的表達(dá)與有

9、無門靜脈癌栓之間的關(guān)系：β-catenin在有門靜脈癌栓組中的平均光密度高于無門靜脈癌栓組，差異有顯著性意義，而E-cadherin則相反(P值均小于0.05)。 二、OPN在原發(fā)性肝細(xì)胞癌組織中的亞細(xì)胞定位 免疫電鏡結(jié)果表明：OPN蛋白陽性的膠體金顆粒主要定位于肝癌細(xì)胞的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，其他部位和癌旁肝組織組中僅有極少量膠體金顆粒散在分布。本組免疫電鏡的超薄切片上未發(fā)現(xiàn)炎性細(xì)胞內(nèi)有OPN蛋白陽性的膠體金顆粒。 三、

10、原位分子雜交結(jié)果 E-cadherin的mRNA陽性表達(dá)定位于癌旁肝細(xì)胞漿內(nèi)，呈紫藍(lán)色，癌細(xì)胞內(nèi)為陰性或極弱表達(dá)。其陽性率和表達(dá)強(qiáng)度均顯示組間差異，即癌旁肝組織組高于肝癌組，差異均有顯著性意義(P值均小于0.05)。 結(jié)論 1.OPN在肝癌組織中呈過表達(dá)狀態(tài)，其主要在肝癌細(xì)胞的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上合成，與門靜脈內(nèi)有無癌栓等臨床病理因素有關(guān)，并與CD44V6的表達(dá)呈正相關(guān)。因此，OPN可能通過CD44V6在肝癌轉(zhuǎn)移過程中起