腺苷A2A受體在CIA小鼠電針抗炎效應(yīng)中的作用機(jī)制研究.pdf

1、本研究分為兩部分。
　　 第一部分 C57BL/6小鼠膠原性關(guān)節(jié)炎模型的建立
　　 目的:用雞Ⅱ型膠原(chick collagenⅡ，CⅡ)與完全弗氏佐劑(completeFreund'adjuvant，CFA)皮內(nèi)免疫C57BL/6小鼠，建立穩(wěn)定的C57BL/6小鼠膠原性關(guān)節(jié)炎模型，觀察CIA小鼠模型的可重復(fù)性。
　　 方法:用雞Ⅱ型膠原(chick collagenⅡ，CⅡ)與完全弗氏佐劑(complete

2、Freund' adjuvant，CFA)在C57BL/6小鼠尾根部皮內(nèi)注射，觀察小鼠生長及體重情況;觀察關(guān)節(jié)部位的腫脹并根據(jù)其腫脹程度進(jìn)行關(guān)節(jié)炎指數(shù)評(píng)分;采用關(guān)節(jié)部位X線攝片、組織病理學(xué)等方法進(jìn)行小鼠的病理學(xué)特征分析。
　　 結(jié)果:1）模型組小鼠于初次免疫后23天出現(xiàn)關(guān)節(jié)紅腫，首發(fā)多見于趾間關(guān)節(jié)，隨后蔓延至足墊及踝關(guān)節(jié)，并可累及前爪，關(guān)節(jié)炎指數(shù)增加，關(guān)節(jié)活動(dòng)障礙。初次免疫后35天發(fā)病率達(dá)到50％，至初次免疫后45天，發(fā)病率達(dá)到

3、最大65％，關(guān)節(jié)炎指數(shù)涵蓋1-16分;2）X線攝片評(píng)價(jià)模型組小鼠關(guān)節(jié)邊緣模糊甚至融合，關(guān)節(jié)間隙狹窄，周圍軟組織影增厚，同時(shí)新生骨增生明顯，導(dǎo)致關(guān)節(jié)出現(xiàn)強(qiáng)直、畸形;3）組織病理學(xué)評(píng)價(jià)模型組小鼠關(guān)節(jié)間隙變窄、炎性細(xì)胞浸潤、滑膜組織增生侵入軟骨和骨組織中，軟骨和骨組織破壞，邊緣不規(guī)則。
　　 結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)成功建立C57BL/6小鼠膠原性關(guān)節(jié)炎模型，雞Ⅱ型膠原誘導(dǎo)的C57BL/6小鼠CIA模型的病理學(xué)特征與人類RA極為相似，為更好地進(jìn)行

4、人類RA的相關(guān)研究提供了一個(gè)良好的動(dòng)物模型。
　　 第二部分 電針、A2AR拮抗劑和A2AR激動(dòng)劑干預(yù)對(duì)CIA小鼠關(guān)節(jié)炎癥的影響
　　 目的:初步探討電針(Electroacupuncture EA)抗炎效應(yīng)與腺苷A2AR受體(A2AR)的關(guān)系，為針刺治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎提供腺苷途徑的理論支持。
　　 方法:于首次免疫后30d篩選出關(guān)節(jié)炎指數(shù)4分以上的發(fā)病鼠40只，按關(guān)節(jié)炎指數(shù)從小到大標(biāo)號(hào)（指數(shù)范圍4-16），根據(jù)隨

5、機(jī)數(shù)字表隨機(jī)分為4組，即模型組、電針組、激動(dòng)劑組和電針加拮抗劑組，每組10只。電針組和電針加拮抗劑組小鼠以自制布袋固定，選取雙側(cè)足三里（后三里）穴和三陰交穴進(jìn)行電針治療。在初次免疫后第5周開始，1次/d，連續(xù)針刺治療2周。生理組和模型組用同樣的方法進(jìn)行固定，每天1次，每次20分鐘，連續(xù)兩周。電針加拮抗劑組每日電針前給予A2AR拮抗劑SCH58261腹膜腔注射，激動(dòng)劑組給予A2AR激動(dòng)劑CGS21680腹膜腔注射，生理組和模型組給予同體積

6、載體溶液（二甲基亞砜+生理鹽水）腹膜腔注射。觀察干預(yù)后各組小鼠關(guān)節(jié)炎指數(shù)、膝踝關(guān)節(jié)組織病理和X線的變化，并用ELISA法檢測各組小鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)水平。進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，評(píng)價(jià)針刺對(duì)膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎小鼠的治療作用，并推測其發(fā)揮作用與腺苷的關(guān)系。
　　 結(jié)果:電針組和激動(dòng)劑組小鼠的TNF-α含量、病理切片評(píng)分和X線評(píng)分明顯低于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，電針組和激動(dòng)劑組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，

7、提示電針治療和注射激動(dòng)劑對(duì)CIA小鼠均有抗炎作用;而電針加拮抗劑組小鼠的的以上指標(biāo)與模型組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，電針聯(lián)合拮抗劑對(duì)CIA小鼠干預(yù)后，電針的抗炎作用被顯著削弱，表明拮抗劑可能通過封閉A2AR從而削弱電針抗炎效應(yīng)，提示電針抗炎效應(yīng)與A2AR密切相關(guān)。
　　 結(jié)論:電針治療和注射激動(dòng)劑能改善CIA小鼠的關(guān)節(jié)炎癥狀，而電針聯(lián)合拮抗劑對(duì)CIA小鼠干預(yù)后，電針的抗炎作用被抑制，從反面提示電針可能增加內(nèi)源性腺苷