聯(lián)苯雙酯納米混懸液的研究.pdf

1、聯(lián)苯雙酯(Bifendate，DDB)是人工合成五味子丙素的中間體，在我國(guó)廣泛應(yīng)用于慢性肝炎的治療。臨床研究表明聯(lián)苯雙酯能明顯降低血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(Glutamic Pyrumic Transaminase，GPT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(Glutamic Oxalic Transaminase，GOT)的活性，顯著增加P-450等肝微粒體的含量，從而增強(qiáng)肝臟的解毒能力;此外，聯(lián)苯雙酯還能減輕由四氯化碳、抗癌藥、抗結(jié)核藥等化學(xué)物質(zhì)引起的肝損傷，保

2、護(hù)肝臟免受毒物損傷。該藥毒性低，安全性好，且價(jià)格低廉，易為患者接受。目前臨床上該藥用于治療慢性遷延性肝炎伴隨的谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性升高，也用于治療化學(xué)毒物、其他藥物引起的谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性升高。但是聯(lián)苯雙酯幾乎不溶于水的性質(zhì)導(dǎo)致該藥口服生物利用度低，一般只有25％～30％。目前有關(guān)聯(lián)苯雙酯的制劑的療效尚不理想，因此需要尋求新的辦法克服其水溶性差帶來(lái)的制劑問(wèn)題。
　　 本課題采用無(wú)載體納米混懸液技術(shù)(carrier-free nanosus

3、pensions)，以聯(lián)苯雙酯為模型藥物，用沉淀-高壓微射流均質(zhì)法(precipitation-combined microfluidization)制備聯(lián)苯雙酯納米混懸液(DDB nanosuspensions，DDB-NSP)。本實(shí)驗(yàn)主要以粒徑、粒徑分布為考察指標(biāo)，考察了有機(jī)溶劑的種類、沉淀溫度、攪拌速度、均質(zhì)壓力及均質(zhì)次數(shù)等對(duì)納米混懸液粒徑的影響，同時(shí)還考察了不同種類和用量的穩(wěn)定劑對(duì)Zeta電位以及制劑穩(wěn)定性的影響，確定了最佳的制

4、備工藝。接下來(lái)又系統(tǒng)研究了DDB-NSP凍干粉針的制備處方和工藝，考察了DDB-NSP凍干粉的飽和溶解度、體外溶出度及儲(chǔ)存穩(wěn)定性，采用DSC和XRD技術(shù)對(duì)其晶型結(jié)構(gòu)進(jìn)行了分析。本課題最后利用高效液相考察了DDB-NSP經(jīng)靜脈注射后在小鼠體內(nèi)的組織分布特征以及藥物動(dòng)力學(xué)特征，以期通過(guò)肝靶向分布達(dá)到提高DDB治療肝臟疾病的效果。
　　 通過(guò)實(shí)驗(yàn)考察最佳處方工藝確定為DDB-穩(wěn)定劑比為4∶5，選用穩(wěn)定性能良好的Lecithin和PVP

5、K30作為穩(wěn)定劑，將處方量的聯(lián)苯雙酯分散在5mlDMSO中，得到有機(jī)相A;將處方量的Lecithin和PVPK30均勻分散在100ml體積的雙蒸水中得到水相B;將制得的有機(jī)相A在0-3℃水浴和攪拌條件下分散于水相B中，低溫超聲適當(dāng)時(shí)間后制得粗混懸劑C。制得的粗混懸劑C通過(guò)高壓微射流納米分散儀，以6990psig、11650psig的壓力分別均質(zhì)2次，然后在23300psig壓力下均質(zhì)10次，即得聯(lián)苯雙酯納米結(jié)晶混懸液。沉淀-高壓均質(zhì)法工

6、藝操作簡(jiǎn)單，重現(xiàn)行良好，透射電鏡下觀察所得的聯(lián)苯雙酯納米結(jié)晶為顆粒狀結(jié)晶，表面不粘連，粒徑分布較窄，平均粒徑為200±4nm，PI為0.308±0.04，Zeta電位為-21.92±0.96mV。
　　 為提高所制備DDB-NSP的儲(chǔ)存穩(wěn)定性，本文進(jìn)一步對(duì)所制得的DDB-NSP進(jìn)行了凍干處理。以外觀、色澤、再分散性為評(píng)價(jià)指標(biāo)，將DDB-NSP膠體混懸液制成凍干粉針劑，其凍干工藝為:在優(yōu)化工藝下制備的聯(lián)苯雙酯納米混懸液中加入5％甘

7、露醇作為支架劑，振搖使溶解，分裝于10ml西林瓶中，置-80℃的超低溫冰箱中冷凍24h，取出，然后迅速移入冷凍干燥機(jī)中，-55C、15mTorr條件下凍干48h，即可得DDB-NSP的凍干品。質(zhì)量評(píng)價(jià)結(jié)果表明凍干過(guò)程對(duì)藥物的粒徑和Zeta電位影響較小。對(duì)凍干品的DSC和XRD分析結(jié)果表明，制成納米混懸液后，藥物納米粒子仍保有原來(lái)的晶型結(jié)構(gòu)。以DDB-NSP凍干粉的外觀、再分散性等為指標(biāo)，評(píng)價(jià)了DDB-NSP凍干針劑的初步穩(wěn)定性，結(jié)果顯示

8、DDB-NSP凍干粉在室溫(20-25℃)、冷藏條件(3-5℃)條件下放置三個(gè)月，其物理化學(xué)穩(wěn)定性良好。用恒溫振蕩器對(duì)DDB-NSP凍干粉的飽和溶解度進(jìn)行考察，結(jié)果表明將DDB粉碎為亞微粒藥物粒子后，其溶解度由37.39μg·ml-1提高到了72.19μg·ml-1;用漿法對(duì)DDB-NSP凍干粉體外溶出進(jìn)行考察，結(jié)果表明與原料藥相比，納米凍干粉末大大提高了DDB的溶出速率。在10min時(shí)，DDB-NSP凍干粉溶出度為79.8％，而原料藥

9、還不到6％，提高了約12.3倍。120min時(shí)，DDB-NSP凍干粉末幾乎全部溶解，而原料藥只溶解了50.4％?？捎肂iexponential方程擬合，方程為:1-Q％=-0.9747e-0.1628t+0.1863e-00107t,rα=0.9969,rβ=0.9965。
　　 本文采用HPLC法，分別測(cè)定了小鼠尾靜脈注射DDB-Sol和DDB-NSP后在體內(nèi)的組織分布情況，結(jié)果表明聯(lián)苯雙酯納米結(jié)晶能夠使DDB靶向濃集于吞噬細(xì)

10、胞豐富的肝中，并延長(zhǎng)DDB在肝中的作用時(shí)間，從而有利于提高DDB的治療效果，具有重要臨床意義。DDB-NSP與DDB-Sol相比，顯著提高了血漿和肝中的藥物濃度水平，并延長(zhǎng)了藥物在體內(nèi)的滯留時(shí)間。值得注意的是，DDB-NSP還降低了藥物在腎中的平均滯留時(shí)間，在一定程度上降低了腎毒性。
　　 家兔體內(nèi)的藥物動(dòng)力學(xué)研究結(jié)果表明DDB-Sol與DDB-NSP的血藥濃度-時(shí)間曲線有顯著不同。靜脈注射DDB-Sol后，家兔體內(nèi)動(dòng)力學(xué)方程為

11、:C=2.04e-0.77t+0.1，清除率CLz=2.83L·h-1·Kg-1，平均滯留時(shí)間MRT很短為1.52h，AUC為3.74h·μg·ml-1。靜脈注射DDB-NSP后，動(dòng)力學(xué)方程為:C=22.445e-0.355t，與DDB-So相比，DDB-NSP的平均滯留時(shí)間MRT有所延長(zhǎng)，而清除率則顯著下降，分別為MRT=2.77h，CLz=0.15L·h-1·Kg-1，DDB-NSP的AUC為64.28h·μg·ml-1，約為DDB