自然臨產(chǎn)前后與NF-KB相互作用蛋白質(zhì)的研究.pdf

1、目的:利用免疫共沉淀聯(lián)合質(zhì)譜分析方法，在自然臨產(chǎn)前后人子宮平滑肌組織內(nèi)篩選與NF-κB相互作用蛋白質(zhì)。
　　 方法:12例健康孕婦（分為未臨產(chǎn)組、自然臨產(chǎn)組，每組6例），剖宮產(chǎn)術(shù)中活檢子宮下段平滑肌組織，分別提取臨產(chǎn)前后的人足月妊娠子宮下段平滑肌總蛋白質(zhì)，應(yīng)用western blotting確定NF-κB p65在這兩組中的表達(dá)，免疫共沉淀技術(shù)分別富集這兩組的NF-κBp65結(jié)合蛋白，SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE

2、)對(duì)免疫沉淀復(fù)合物進(jìn)行分離，從膠中切取NF-κBp65結(jié)合蛋白條帶，膠內(nèi)酶解后進(jìn)行電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜(LC-E S I-MS/MS)分析。
　　 結(jié)果:Western bloting驗(yàn)證了NF-κB p65在臨產(chǎn)前后人子宮下段平滑肌中的表達(dá)，通過(guò)搜索數(shù)據(jù)庫(kù)在人子宮平滑肌中鑒定出12個(gè)NF-κBp65結(jié)合蛋白。所鑒定的12個(gè)蛋白根據(jù)其功能，有以下幾類:細(xì)胞骨架蛋白、信號(hào)傳導(dǎo)相關(guān)蛋白質(zhì)、急性相反應(yīng)蛋白類及代謝和能量相關(guān)酶類。
　　

3、 結(jié)論:采用免疫共沉淀藕聯(lián)肽質(zhì)量指紋質(zhì)譜技術(shù)，在自然臨產(chǎn)前后人子宮平滑肌組織中篩選出12個(gè)與NF-κBp65相互作用的蛋白，分別是 Desmin, EH domain-containing protein2, Heat shock70 kDaprotein, Annexin A6, Alpha-actinin-1, Filamin-A, TRIM27 Isoform Beta ofZinc finger protein RFP, Vi

4、mentin, ATP synthase subunit alpha,mitochondrial, Isoform1 of Alpha-1-antitrypsin, Tubulin alpha-1A chain,Tubulin alpha-1C chain。其中，足月臨產(chǎn)組與未臨產(chǎn)組有9個(gè)相同的蛋白，足月臨產(chǎn)組比未臨產(chǎn)組多3個(gè)差異蛋白:Alpha-actinin-1，F(xiàn)ilamin-A，TRIM27 Isoform Beta of Zi