在自然臨產(chǎn)和藥物臨產(chǎn)中與NF-kB相互作用的蛋白質(zhì)的研究.pdf

1、目的:篩選足月自然臨產(chǎn)和藥物臨產(chǎn)中人類子宮下段平滑肌組織內(nèi)與核因子kappaB(NuclearfactorkappaB，NF-κB)相互作用的蛋白質(zhì)，進(jìn)一步闡明分娩發(fā)動的機(jī)制。
　　 方法:收集自然臨產(chǎn)及藥物臨產(chǎn)(前列腺素E2栓誘導(dǎo)臨產(chǎn)，簡稱藥物臨產(chǎn))兩種不同狀態(tài)臨產(chǎn)后子宮下段平滑肌標(biāo)本，首先通過Westernblotting驗(yàn)證目的蛋白NF-κBp65的表達(dá)，然后采用免疫共沉淀方法，從臨產(chǎn)后子宮下段平滑肌組織中篩選出與NF-κ

2、Bp65結(jié)合的蛋白質(zhì)復(fù)合物，經(jīng)過SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)技術(shù)對含NF-κBp65結(jié)合蛋白的復(fù)合物進(jìn)行分離，進(jìn)而采用液相色譜一電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜(liquidchromatography-tandemelectrospraymassspectrmetry，LC-ESI-MS/MS)結(jié)合數(shù)據(jù)庫查詢鑒定不同誘因的臨產(chǎn)后子宮下段平滑肌組織中與NF-κB相互作用蛋白質(zhì)。
　　 結(jié)果:1.經(jīng)Westernblotting驗(yàn)

3、證，自然臨產(chǎn)組和藥物臨產(chǎn)組在分子量65KDa處均有明顯的條帶顯示，提示兩組子宮下段平滑肌組織中均有NF-κBp65的表達(dá)。
　　 2.收集自然臨產(chǎn)組和藥物臨產(chǎn)組的免疫共沉淀復(fù)合物進(jìn)行SDS-PAGE分離，兩組均在分子量72KDa處觀察到1條與陰性對照組(IgG抗體組)有差異的蛋白條帶。
　　 3.經(jīng)質(zhì)譜分析及數(shù)據(jù)庫查詢，在人類自然臨產(chǎn)和藥物臨產(chǎn)子宮下段平滑肌組織中鑒定了7個(gè)NF-κBp65結(jié)合蛋白，根據(jù)其功能注釋，可將以

4、上鑒定出蛋白質(zhì)初步分為以下3類:①細(xì)胞結(jié)構(gòu)相關(guān)蛋白質(zhì);②分子伴侶;③信號傳導(dǎo)相關(guān)蛋白質(zhì)。
　　 結(jié)論:采用免疫共沉淀方法結(jié)合肽質(zhì)量指紋質(zhì)譜技術(shù)，在自然臨產(chǎn)組的子宮下段平滑肌組織內(nèi)篩選了7個(gè)與NF-κBp65結(jié)合的蛋白質(zhì)，包括:結(jié)蛋白、細(xì)絲蛋白-A、輔肌動蛋白、鋅指蛋白、熱休克蛋白70、膜聯(lián)蛋白A6、EH-結(jié)構(gòu)域蛋白2;在藥物臨產(chǎn)組的子宮下段平滑肌組織內(nèi)篩選了5個(gè)與NF-κBp65結(jié)合的蛋白質(zhì)，包括:結(jié)蛋白、細(xì)絲蛋白-A、輔肌動蛋