聯(lián)合IL-4突變體及IL-5可溶性受體α對哮喘小鼠氣道炎癥的影響.pdf

1、支氣管哮喘(簡稱哮喘)是由多種細(xì)胞(包括氣道本身的結(jié)構(gòu)細(xì)胞和外來的炎性細(xì)胞)如平滑肌細(xì)胞(smooth muscle cell,SMC)、氣道上皮細(xì)胞(airway epithelial cell,AEC)、嗜酸性粒細(xì)胞(eosinophils,EOS)、肥大細(xì)胞(Mast cell)、T淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞等和其細(xì)胞組分所共同參與的氣道慢性炎癥性疾病,常導(dǎo)致氣道高反應(yīng)性(airway hyper reactivity,AHR),出現(xiàn)廣

2、泛多變的可逆性氣流受限。近年來,隨著環(huán)境問題的復(fù)雜化,全球哮喘患者人數(shù)不斷增加;2011年末在上海舉辦的16屆亞太呼吸學(xué)會(APSR)年會,同樣提出中國哮喘患病率逐年增加,不容樂觀。哮喘已成為危害人類健康的最常見疾病之一;且難治性哮喘、哮喘持續(xù)狀態(tài)等重癥哮喘治療效果差、死亡率高,臨床急需新的、更有效的治療方法。
　　在哮喘的炎癥中,目前認(rèn)為主要機(jī)制仍是TH2占優(yōu)勢的適應(yīng)性免疫應(yīng)答,分泌IL-4、IL-5、IL-13等細(xì)胞因子聚集在

3、炎癥部位,作用相應(yīng)的炎癥細(xì)胞導(dǎo)致慢性炎癥反應(yīng)的發(fā)生。近年研究發(fā)現(xiàn),固有免疫應(yīng)答也參與其中,研究主要聚焦于新發(fā)現(xiàn)的ILC2細(xì)胞(Type2-Innate lymphoid cell,II型先天淋巴細(xì)胞),其主要聚集于支氣管粘膜周圍,可以對上皮損傷產(chǎn)生直接應(yīng)答,同時產(chǎn)生TH2類細(xì)胞因子并促進(jìn)TH2細(xì)胞應(yīng)答;ILC2的發(fā)現(xiàn)提供了TH2型炎癥肺部發(fā)生的基礎(chǔ)[1,2]。而無論是TH2細(xì)胞或ILC2細(xì)胞,主要的作用因子都是IL-4、IL-5、IL-

4、13,這些白介素因子可通過多種途徑誘導(dǎo)哮喘炎癥的關(guān)鍵細(xì)胞EOS[3],使其在肺部的聚集增多并使其凋亡減少,促進(jìn)著哮喘的發(fā)生。因此,對上述炎癥因子進(jìn)行多層面的聯(lián)合干預(yù)或許能為阻斷哮喘炎癥的發(fā)展提供新的思路。本實(shí)驗(yàn)聯(lián)合應(yīng)用IL-4突變體(IL-4MT)及IL-5可溶性受體α(sIL-5Rα)對哮喘小鼠進(jìn)行靶向干預(yù),觀察其對炎癥水平的影響,探討其作用機(jī)理。
　　目的:本研究聯(lián)合應(yīng)用IL-4突變體及IL-5可溶性受體α對哮喘小鼠進(jìn)行靶向干

5、預(yù),觀察哮喘小鼠氣道炎癥水平的變化,初步探討聯(lián)合 IL-4突變體及 IL-5可溶性受體α對哮喘炎癥的治療效果,為哮喘的控制提供新的思路。
　　方法:50只雌性BALB/c小鼠隨機(jī)分為正常對照組、哮喘組、IL-4MT干預(yù)組、sIL-5Rα干預(yù)組、IL-4MT及sIL-5Rα聯(lián)合干預(yù)組(簡稱聯(lián)合干預(yù)組)。哮喘組和各干預(yù)組分別給予卵蛋白(OVA)致敏和激發(fā)。其中,IL-4MT干預(yù)組、sIL-5Rα干預(yù)組、聯(lián)合干預(yù)組分別于激發(fā)前30min

6、腹腔注射 IL-4MT100μg、sIL-5Rα100μg及IL-4MT、sIL-5Rα各100μg進(jìn)行干預(yù),正常對照組和哮喘組生理鹽水代替。支氣管肺泡灌洗液(BALF)計(jì)數(shù)白細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞(EOS)比例;HE染色觀察肺組織病理變化;ELISA法測定各組 BALF中 IL-4、IL-5、嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子(Eotaxin)水平變化;末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的d-UTP切口末端標(biāo)記(TUNEL)法檢測肺組織EOS凋亡情況。
　

7、　結(jié)果:與正常對照組比較,哮喘組小鼠肺組織出現(xiàn)典型病理損害,EOS比例[(27.26±1.99)％vs(1.02±0.18)%,P<0.001)]、IL-4[(69.86±6.99) pg/ml vs(32.74±6.34) pg/ml,P<0.001)]、IL-5[(183.29±15.13) pg/ml vs(92.81±6.72) pg/ml,P<0.001)]、Eotaxin[(102.36±11.90) pg/ml vs(38

8、.79±7.15) pg/ml,P<0.001)]水平均顯著升高,EOS凋亡率[(3.26±1.28)%vs(10.63±2.75)%,P<0.001)]顯著下降;與哮喘組比較,各干預(yù)組小鼠肺組織病理損害明顯減輕,EOS比例[IL-4MT干預(yù)組(13.20±1.62)%、sIL-5Rα干預(yù)組(12.20±1.07)%、聯(lián)合干預(yù)組(8.57±0.91)%vs(27.26±1.99)%,P值均<0.001]明顯下降;Eotaxin水平[IL

9、-4MT干預(yù)組(77.46±10.05) pg/ml、sIL-5Rα干預(yù)組(84.40±11.99)pg/ml、聯(lián)合干預(yù)組(66.62±9.21)pg/ml vs(102.36±11.90) pg/ml,P值均<0.001]明顯下降;EOS凋亡率[IL-4MT干預(yù)組(9.28±3.71)%、sIL-5Rα干預(yù)組(11.46±3.34)%、聯(lián)合干預(yù)組(13.52±3.65)% vs(3.26±1.28)%,P值均<0.001]明顯增高;與