不同濃度慶大霉素對(duì)兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外軟骨形成能力影響的研究.pdf

1、目的:本文研究兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Bone marrow stem cells，BMSCs)在體外分離培養(yǎng)、誘導(dǎo)分化為成軟骨的能力，并初步觀(guān)察不同濃度（0μg/m、10μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml）慶大霉素對(duì)其增殖、分化成軟骨的影響。
　　 方法:無(wú)菌條件下，從8周齡家兔取下一側(cè)股骨及脛腓骨，通過(guò)全血培養(yǎng)法分離骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，接種于含有胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液中培養(yǎng)傳代。每日以倒置顯微鏡觀(guān)察細(xì)

2、胞形態(tài)及生長(zhǎng)情況。取第三代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分五組，包含一個(gè)對(duì)照組（培養(yǎng)液為兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞完全培養(yǎng)基: DMEM、10％胎牛血清、100U/ml青霉素、100μg/ml鏈霉素，不含慶大霉素）和四個(gè)含慶大霉素濃度組（分別是10μg/ml、50μ g/ml、100μg/ml、200μg/ml加兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞完全培養(yǎng)基）。采用MTT比色法進(jìn)行增殖活性比較，Ⅱ型膠原免疫細(xì)胞化學(xué)染色和細(xì)胞甲苯胺藍(lán)染色檢測(cè)成軟骨分化情況。
　　 結(jié)果

3、:1.體外培養(yǎng)的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞呈扁平的梭形成纖維樣細(xì)胞生長(zhǎng)，且細(xì)胞形態(tài)均一，傳代穩(wěn)定。2.MTT實(shí)驗(yàn)顯示慶大霉素在100μg/ml、200μg/ml抑制細(xì)胞增殖，其余各濃度組對(duì)細(xì)胞增殖無(wú)明顯影響3.誘導(dǎo)后細(xì)胞甲苯胺藍(lán)染色顯示100μg/ml組及200μg/ml組細(xì)胞細(xì)胞染色較淺，大部分細(xì)胞失染，余各組陽(yáng)性表達(dá):Ⅱ型膠原免疫組織化學(xué)染色顯示100μg/ml組及200μg/ml組細(xì)胞弱陽(yáng)性表達(dá)，余各組陽(yáng)性表達(dá)。
　　 結(jié)論:1兔骨