銀杏內(nèi)酯B對內(nèi)皮祖細(xì)胞的保護(hù)作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的：觀察銀杏內(nèi)酯B(Ginkolide B，GB)對氧化低密度脂蛋白(oxidized lowdensity lipoprotein，ox-LDL)損傷后內(nèi)皮祖細(xì)胞(endothelial progenitorcells，EPCs)功能的影響，并探討其可能的保護(hù)機(jī)制。
　　 方法：密度梯度離心法獲取臍血單個核細(xì)胞，以5×106/cm2密度接種細(xì)胞到事先包被纖維連接蛋白的培養(yǎng)皿，加入含20％胎牛血清的EBM-2培養(yǎng)液，培養(yǎng)三天后

2、，以培養(yǎng)液洗去未貼壁細(xì)胞后得到貼壁細(xì)胞，繼續(xù)原條件培養(yǎng)、擴(kuò)增、分化。培養(yǎng)7 d后，通過DiI標(biāo)記乙酰化人低密度脂蛋白(DiI-ac-LDL)和FITC標(biāo)記的荊豆凝集素I(FITC-UEA-I lectin)雙染實驗及Ⅷ因子相關(guān)抗原免疫組化鑒定內(nèi)皮祖細(xì)胞。收集貼壁細(xì)胞并隨機(jī)分為對照組，氧化低密度脂蛋白組(50ug·mL-1)及銀杏內(nèi)酯B干預(yù)組(氧化低密度脂蛋白50 ug·mL-1加銀杏內(nèi)酯B，濃度分為50，100和150 ug·mL-1)

3、，干預(yù)24 h后分別采用CCK8比色法、黏附能力測定實驗、改良Boyden小室法觀察EPCs的增殖能力、黏附能力和遷移能力，并取各組細(xì)胞裂解液行實時熒光定量PCR檢測NF-к B P65 mRNA的表達(dá)量。
　　 結(jié)果：人臍血單個核細(xì)胞培養(yǎng)三天后，形成典型內(nèi)皮祖細(xì)胞樣集落，培養(yǎng)第7天貼壁細(xì)胞DiI-ac-LDL和FITC-UEA-I lectin雙染實驗陽性，熒光顯微鏡下發(fā)紅色及綠色熒光。Ⅷ因子相關(guān)抗原免疫組化陽性，胞漿呈棕黃色

4、。氧化低密度脂蛋白損傷后，EPCs的增殖能力(0.700±0.046 vs1.119±0.031，P(0.01)、黏附能力(16.3±3.2 vs27.9±5.1，P<0.01)，遷移能力(19.8±3.4 vs38.3±2.6，P(0.01)顯著受損，細(xì)胞裂解液NF-к B P65 mRNA表達(dá)量(4.083±0.218倍，P<0.05)顯著增高；銀杏內(nèi)酯B干預(yù)24h后，顯著改善了外周血EPCs的增殖能力(1.069±0.032，1.

5、184±0.044，1.262±0.060vs0.700±0.046，P均<0.01)、黏附能力(16.9±2.8，19.8±3.3，25.8±3.4vs16.3±3.2，P均<0.05)，遷移能力(30.0±2.1，32.8±3.8，36.5±2.1vs19.8±3.4，P均<0.05)，細(xì)胞保護(hù)作用隨銀杏內(nèi)酯B的濃度升高而增強(qiáng)，且銀杏內(nèi)酯B各組NF-к B P65 mRNA表達(dá)量隨銀杏內(nèi)酯B濃度升高而顯著減少(1.437±0.110