內皮祖細胞在sepsis發(fā)展中的作用及機制研究.pdf

1、目的:
　　檢測成人外周血內皮祖細胞(cEPCs)的正常值，為開展相關研究奠定基礎;通過臨床、動物研究觀察和分析sepsis時cEPCs數量變化及其意義，并初步探討其機制;探討外源性EPCs對sepsis的影響，以期闡明其在炎性組織損傷發(fā)生中的作用。
　　方法:
　　排除已知影響因素，以CD34+/CD133+/VEGFR-2+為表型標志，采用流式細胞學方法(FCM)檢測健康成人cEPCs數量，統計并確立正常值范圍;對

2、排除已知影響因素的35例入選sepsis患者（2006.11-2008.1，上海交通大學醫(yī)學院附屬瑞金醫(yī)院SICU），于不同時點(發(fā)病后2d內、3、7、14、21d)采用FCM檢測 cEPCs數量，同時分別采用ELISA和免疫濁度法檢測血漿TNF-α、IL-10、D-二聚體和血清AT-Ⅲ水平;建立大鼠sepsis模型，動態(tài)觀察（制模后0h、6h、12h、18h、1d、2d、3d、7d）上述指標變化，同時分別采用濕/干重比和熒光素鈉法觀察

3、組織毛細血管滲漏程度。常規(guī)病理學觀察組織損傷狀況并評分;觀察SDF-1α、VEGF、LPS、TNF-α、對離體EPCs增殖（MTT法）和凋亡(FCM)的影響;將體外培養(yǎng)的EPCs注入sepsis動物模型體內，進一步觀察TNF-α、IL-10、D-二聚體、AT-Ⅲ水平變化，及毛細血管滲漏及組織損傷程度。
　　結果:
　　健康成人cEPCs的正常參考范圍是85.3～1073.1個/106PBMCs(160.4～1979.0個/m

4、L)，不同年齡及性別組其數量沒有顯著差異;不同預后sepsis患者cEPCs變化呈現不同規(guī)律，存活患者sepsis發(fā)生2d后，cEPCs數量明顯升高(p＜0.01)，發(fā)病7d達到高峰，此后逐步降低，21d至正常水平，于此同時伴有循環(huán)高水平TNF-α、IL-10、D-二聚體和AT-Ⅲ(p＜0.01)，并與cEPCs水平呈正相關(p＜0.01)，而死亡患者在整個疾病過程中cEPCs持續(xù)處于低水平(p＜0.05); sepsis誘發(fā)后，大鼠c

5、EPCs數量明顯增加(p＜0.01)并伴有循環(huán)TNF-α、IL-10、D-二聚體、AT-Ⅲ升高，以及肝、腎、肺濕/干重比、組織熒光素鈉強度增加和組織損傷加重，cEPCs數量與上述各指標變化均呈正相關(p＜0.01);SDF-1α和VEGF促進離體培養(yǎng)EPCs的增殖(p＜0.05)，而LPS和TNF-α明顯抑制EPCs增殖并促使其凋亡(p＜0.05);給sepsis動物靜脈輸注外源性EPCs后，其循環(huán)TNF-α、D-二聚體水平及肝、肺濕/

6、干重比、組織熒光素鈉強度明顯降低(p＜0.05)，組織病理損傷減輕(p＜0.05)。
　　結論:
　　1.以CD34+/CD133+/VEGFR-2+為表型標記，采用FCM檢測方法，健康成年人cEPCs數量的正常范圍是85.3～1073.1個/106PBMCs(160.4～1979.0個/mL)。
　　2.不同預后sepsis，cEPCs呈截然不同變化，其變化與疾病預后和炎癥反應程度相關，并具有一定的評估和預測價值，其