Apelin-13促進臍帶華通膠間充質干細胞分化成血管網.pdf

1、目的：
　　探索apelin對干細胞定向血管網分化的調控作用。
　　方法：
　　采用組織塊貼壁法從人臍帶華通膠組織中分離間充質干細胞，流式細胞儀檢測其免疫表型。取第3代人華通膠間充質干細胞，分別接種于4個培養(yǎng)瓶中，記為A1,A2,A3,A4組，用誘導液誘導7天，每天向 A2,A3,A4組中分別加入濃度1×10－6,10×10－6,100×10－6 mol/L的apelin-1320微升，向A1中加入20微升的空白DME

2、M-F12培養(yǎng)基,倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)及生長情況，并對其進行血管性血友病因子抗體（vWF）免疫熒光染色及CD31流式細胞學鑒定。使用水凝膠的三維培養(yǎng)基對誘導后的內皮細胞進行培養(yǎng),并按照原A1,A2,A3,A4組的順序重新依次編號為S1,S2,S3,S4四組。每天分別向S2,S3,S4組中加入濃度1×10－6,10×10－6,100×10－6 mol/L的apelin-1320微升，S1中加入20微升的DMEM-F12作為空白對照組。

3、7天后,倒置顯微鏡下觀察細胞的形態(tài)、生長情況及在三維培養(yǎng)基中形成血管樣結構情況。
　　結果：
　　人華通膠源間充質干細胞可以誘導分化為vWF免疫熒光染色陽性的內皮樣細胞。隨著apelin-13蛋白濃度的增加，CD31陽性表達率也隨之升高。顯微鏡下觀察到內皮樣細胞在水凝膠的三維培養(yǎng)基中能夠形成血管樣結構。
　　結論：
　　本研究證實apelin可調控hUC-MSCs向血管內皮細胞分化，apelin-13呈劑量依賴性