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文檔簡介
1、目的:提取大鼠牙髓干細胞(Dental Pulp Stem Cells,DPSCs)與骨髓間充質干細胞(Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells,BMSCs),傳代培養(yǎng)觀察二者形態(tài)學,以及其生長差異。免疫熒光染色觀察大鼠牙髓干細胞標志物表達。通過礦化誘導,觀察大鼠牙髓干細胞與骨髓間充質干細胞向成骨樣細胞分化能力,并通過免疫熒光對其進行表面成骨標志物檢測,觀察其鈣化結節(jié)形成能力,對比討論大鼠牙髓干細胞的成骨樣細
2、胞分化能力與特點。
方法:通過離心法獲得大鼠骨髓細胞,全骨髓體外貼壁培養(yǎng)擴增,并通過倒置顯微鏡觀察其形態(tài);通過酶消化法處理大鼠牙髓組織獲得牙髓干細胞,體外培養(yǎng)擴增,通過倒置顯微鏡觀察形態(tài)。通過流式細胞儀檢測所獲得細胞表面CD45,CD90分子表達;通過免疫熒光染色檢測細胞表面STRO-1表達;MTT法分別測得大鼠骨髓間充質干細胞與牙髓干細胞的生長曲線,對照分析,比較二者在生長擴增上的差異;分別對大鼠牙髓干細胞與骨髓間充質干
3、細胞進行礦化誘導培養(yǎng),2周后對其進行骨鈣素(OCN),牙本質泌涎蛋白(DSP)免疫熒光染色;繼續(xù)培養(yǎng)四周,對經(jīng)誘導的大鼠牙髓干細胞進行茜素紅染色觀察鈣結節(jié)形成情況。
結果:通過離心法獲得的大鼠骨髓細胞經(jīng)過貼壁培養(yǎng),換液逐漸將造血系細胞清除,得到相對純度較高的骨髓間充質干細胞貼壁生長;通過酶消化法獲得的大鼠牙髓干細胞第二天可完全貼壁生長;所獲得的細胞經(jīng)流式細胞儀檢測CD45表達陰性,CD90表達陽性,符合間充質干細胞特性;免
4、疫熒光染色STRO-1表達陽性,符合干細胞表達特性;MTT法繪制生長曲線可見大鼠牙髓干細胞與骨髓間充質干細胞第4天左右進入生長對數(shù)期,牙髓干細胞生長增殖速度快于骨髓間充質干細胞;經(jīng)過礦化誘導2周后骨髓間充質干細胞與牙髓細胞表達成骨細胞表面標志物OCN陽性,牙髓干細胞表達牙本質細胞標志物DSP陽性;經(jīng)4周礦化誘導培養(yǎng),大鼠牙髓干細胞茜素紅染色證實有礦化結節(jié)生成。
結論:通過離心獲得的骨髓細胞經(jīng)全骨髓貼壁培養(yǎng)可隨著貼壁換液的進
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