海水蛭弧菌的分離純化、生長(zhǎng)特性及應(yīng)用.pdf

1、噬菌蛭弧菌(Bdellovibrio bacteriovorus，以下簡(jiǎn)稱蛭弧菌)是一類以黏附、裂解宿主菌方式使自身得以生長(zhǎng)繁殖的微生物，廣泛存在于各種自然水體。論文試驗(yàn)期間在海南對(duì)當(dāng)?shù)胤桨邧|風(fēng)螺、南美白對(duì)蝦、九孔鮑魚(yú)、斜帶石斑魚(yú)、點(diǎn)帶石斑魚(yú)、鋸緣青蟹的育苗池和養(yǎng)殖池，綠藻藻池以及養(yǎng)殖區(qū)周邊的海域和遠(yuǎn)離養(yǎng)殖區(qū)的外海海域進(jìn)行海水微生物環(huán)境調(diào)查；同時(shí)對(duì)黃浦江河水、生活污水及上海滬東污水處理廠水樣進(jìn)行淡水微生物環(huán)境調(diào)查。調(diào)查結(jié)果發(fā)現(xiàn)所有被檢測(cè)

2、水域均有噬菌蛭弧菌的存在，數(shù)量在10<'1>～10<'3> pfu/ml不等，表現(xiàn)為與水體中細(xì)菌總數(shù)、弧菌數(shù)成正相關(guān)。 從海南瓊海對(duì)蝦養(yǎng)殖場(chǎng)及其周邊排水溝采集水樣，比較不同分離方法、上層培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)鹽濃度和富集培養(yǎng)與直接培養(yǎng)等對(duì)海水蛭弧菌分離、計(jì)數(shù)的影響，從而建立了海水蛭弧菌分離和純化的方法--下層1.0％瓊脂，上層0.5％瓊脂的無(wú)營(yíng)養(yǎng)鹽海水雙層瓊脂平板法。應(yīng)用無(wú)營(yíng)養(yǎng)鹽的海水雙層瓊脂平板法，采用6種宿主菌分別對(duì)海南4份海水樣品進(jìn)行

3、計(jì)數(shù)檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)不同宿主菌所得到的蛭弧菌數(shù)量不同，根據(jù)噬菌斑的大小、形狀和斑形成速度分離出235株蛭弧菌海水菌株，同時(shí)對(duì)分離純化到的3株蛭弧菌海水菌株進(jìn)行液體培養(yǎng)增殖，進(jìn)一步檢驗(yàn)了海水雙層瓊脂平板法的可靠性。 對(duì)利用雙層瓊脂平板法分離純化獲得的蛭弧菌海水菌株.Bdh5221 裂解特性及生長(zhǎng)影響因子進(jìn)行了初步研究，研究結(jié)果表明，蛭弧菌海水菌株：Bdh5221對(duì)嗜水氣單胞菌、副溶血弧菌、鰻弧菌、溶藻弧菌、哈維氏弧菌、大腸桿菌、熒光假單

4、胞菌、遲鈍愛(ài)德華氏菌等革蘭氏陰性菌有較好的裂解作用，對(duì)八疊球菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽胞桿菌等革蘭氏陽(yáng)性菌的裂解能力較弱，對(duì)木糖葡萄球菌和啤酒酵母菌不裂解；可在超聲波破碎后的G<'+>菌和酵母菌上生長(zhǎng)。蛭弧菌Bdh5221在宿主菌濃度10<'6>～10<'9>cfu/ml下均可正常生長(zhǎng)，高濃度宿主菌更利于蛭弧菌生長(zhǎng)；Bdh5221最適生長(zhǎng)的pH在7.0～7.5之間，鹽度為20～30左右；Bdh5221增殖速度與起始接種濃度影響不大，起始

5、接種濃度10<'1>～10<'3>pfu/ml下經(jīng)過(guò)5～7d生長(zhǎng)可增殖4log左右；Bdh5221保藏選擇20％～30％甘油含量較為合適，低溫條件更利于保藏。 安全性試驗(yàn)結(jié)果表明，添加1.5×10<'6>pfu/ml蛭弧菌海水菌株Bdh5221對(duì)南美白對(duì)蝦無(wú)毒害作用；添加2.0×10<'2>pfu/ml，2.0×10<'3>pfu/ml，2.0×10<'4> pfu/mlBdh5221均對(duì)鋸緣青蟹蚤狀幼體階段五個(gè)變態(tài)期幼體存活率

6、和變態(tài)率無(wú)影響。鋸緣青蟹苗種培育中應(yīng)用蛭弧菌海水菌株Bdh5221試驗(yàn)，進(jìn)一步表明，其最適有效添加量為1.5×10<'1>pfu/ml；添加蛭弧菌的試驗(yàn)組水體微生態(tài)環(huán)境明顯改善，在育苗后期，相較對(duì)照組而言，試驗(yàn)組水體中弧菌和細(xì)菌總數(shù)都維持在較低水平，兩者相差1～2個(gè)數(shù)量級(jí)，而成活率和變態(tài)率試驗(yàn)組則比對(duì)照組分別高6.6％和6.3％；同時(shí)試驗(yàn)組水質(zhì)有所改善，其中NH<,4>-N比對(duì)照組低0.11～0.34 mg/1。 從蛭弧菌在鋸緣