抗弧菌中草藥的篩選及其活性化合物的分離純化.pdf

1、弧菌病是水產(chǎn)養(yǎng)殖魚類最重要的細菌病之一，其暴發(fā)性強，不易控制，每年給水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)造成重大的經(jīng)濟損失。目前細菌性病害的防治主要依靠抗生素及化學藥物，不僅污染水體環(huán)境，而且對魚體造成傷害，降低魚體免疫力，形成惡性循環(huán)。而且大量使用抗生素，使耐藥性菌株不斷出現(xiàn)，使病害更加難以控制。 用乙醇浸漬法提取了53種常見中藥有效成分，采用平板擴散法研究了對主要致病鰻弧菌(Vibrio anguillarum)、副溶血弧菌(V.parahaemol

2、yticus)的抑菌作用，發(fā)現(xiàn)金銀花、大黃、五倍子、五味子、肉桂、月季花、烏梅、訶子、青果等這九種中藥有較強的抑菌活性；進一步研究了這些藥物的抑菌譜，除金銀花外，五倍子、五味子、肉桂、大黃、月季花、烏梅、訶子、青果對哈維氏弧菌(V.harvayi)、擬態(tài)弧菌(V.mimicus)、溶藻膠弧菌(V. alginolyticus)、創(chuàng)傷弧菌(V.vulnificus)、坎貝氏弧菌(V.campbelli)、費氏弧菌(V.fischeri)、

3、豚鼠氣單胞菌(Aeromonas caviae)、嗜水氣單胞菌(A.hydrophila)、遲緩愛得德華氏菌(Edwardsilla tarda)均具有不同程度的抗菌活性，其中烏梅，訶子、青果對所測12個菌株均表現(xiàn)抑菌活性；肉桂對擬態(tài)弧菌(V.mimicus)表現(xiàn)極強抑菌活性，抑菌圈直徑達42mm。 采用硅膠柱層析、Sephadex LH-20凝膠柱層析對月季花乙醇粗提液有效抗菌成分進行了分離純化，得到51mg無色針狀結晶。通過

4、質(zhì)譜(ESI-MS)，核磁共振譜(<'1>H-NMR、<'13>C-NMR、<'13>C-dept)對其結構進行鑒定，根據(jù)光譜數(shù)據(jù)并與文獻對照，發(fā)現(xiàn)該化合物的相關數(shù)據(jù)與沒食子酸(gallic acid)的一致，通過TLC技術，與標準品對照，最后鑒定該化合物為沒食子酸(gallic acid)。 采用平板擴散法，研究了該化合物對哈維氏弧菌、副溶血弧菌、溶藻膠弧菌、鰻弧菌、創(chuàng)傷弧菌、坎貝氏弧菌、擬態(tài)弧菌、豚鼠氣單胞菌、嗜水氣單胞菌、

5、豬霍亂沙門氏菌(Salmonella choleraesuis)、肺炎克雷伯菌肺炎亞種(Klebsilla pneumoni aesubsp)、產(chǎn)堿假單胞菌(Pseudomonas alcaligenes)、普通變形桿菌(Proteus vulgaris)、牛莫拉氏菌(Morascella bovis)、遲緩愛德華氏菌(Edwardsieiia tarda)、單增李斯特菌(Listeria monocytogenes)、金黃色葡萄球菌(

6、Staphylococcus aureus)的抑菌效果，發(fā)現(xiàn)gallic acid特異性抑制哈維氏弧菌、副溶血弧菌、溶藻膠弧菌、鰻弧菌、創(chuàng)傷弧菌，而對所測其它弧菌及非弧菌屬不表現(xiàn)活性。采用試管二倍稀釋法測定了gallic acid對鰻弧菌(V.anguillarum)CW1的最小抑菌濃度(MIC)，并與常見抗生素卡那霉素(kanamycin)進行了比較研究。結果發(fā)現(xiàn)，沒食子酸(gallic acid)對鰻弧菌(V. anguillaru