抗弧菌中草藥的篩選及其活性化合物的分離純化.pdf

1、弧菌病是水產(chǎn)養(yǎng)殖魚(yú)類最重要的細(xì)菌病之一，其暴發(fā)性強(qiáng)，不易控制，每年給水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)造成重大的經(jīng)濟(jì)損失。目前細(xì)菌性病害的防治主要依靠抗生素及化學(xué)藥物，不僅污染水體環(huán)境，而且對(duì)魚(yú)體造成傷害，降低魚(yú)體免疫力，形成惡性循環(huán)。而且大量使用抗生素，使耐藥性菌株不斷出現(xiàn)，使病害更加難以控制。 用乙醇浸漬法提取了53種常見(jiàn)中藥有效成分，采用平板擴(kuò)散法研究了對(duì)主要致病鰻弧菌(Vibrio anguillarum)、副溶血弧菌(V.parahaemol

2、yticus)的抑菌作用，發(fā)現(xiàn)金銀花、大黃、五倍子、五味子、肉桂、月季花、烏梅、訶子、青果等這九種中藥有較強(qiáng)的抑菌活性；進(jìn)一步研究了這些藥物的抑菌譜，除金銀花外，五倍子、五味子、肉桂、大黃、月季花、烏梅、訶子、青果對(duì)哈維氏弧菌(V.harvayi)、擬態(tài)弧菌(V.mimicus)、溶藻膠弧菌(V. alginolyticus)、創(chuàng)傷弧菌(V.vulnificus)、坎貝氏弧菌(V.campbelli)、費(fèi)氏弧菌(V.fischeri)、

3、豚鼠氣單胞菌(Aeromonas caviae)、嗜水氣單胞菌(A.hydrophila)、遲緩愛(ài)得德華氏菌(Edwardsilla tarda)均具有不同程度的抗菌活性，其中烏梅，訶子、青果對(duì)所測(cè)12個(gè)菌株均表現(xiàn)抑菌活性；肉桂對(duì)擬態(tài)弧菌(V.mimicus)表現(xiàn)極強(qiáng)抑菌活性，抑菌圈直徑達(dá)42mm。 采用硅膠柱層析、Sephadex LH-20凝膠柱層析對(duì)月季花乙醇粗提液有效抗菌成分進(jìn)行了分離純化，得到51mg無(wú)色針狀結(jié)晶。通過(guò)

4、質(zhì)譜(ESI-MS)，核磁共振譜(<'1>H-NMR、<'13>C-NMR、<'13>C-dept)對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行鑒定，根據(jù)光譜數(shù)據(jù)并與文獻(xiàn)對(duì)照，發(fā)現(xiàn)該化合物的相關(guān)數(shù)據(jù)與沒(méi)食子酸(gallic acid)的一致，通過(guò)TLC技術(shù)，與標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照，最后鑒定該化合物為沒(méi)食子酸(gallic acid)。 采用平板擴(kuò)散法，研究了該化合物對(duì)哈維氏弧菌、副溶血弧菌、溶藻膠弧菌、鰻弧菌、創(chuàng)傷弧菌、坎貝氏弧菌、擬態(tài)弧菌、豚鼠氣單胞菌、嗜水氣單胞菌、

5、豬霍亂沙門氏菌(Salmonella choleraesuis)、肺炎克雷伯菌肺炎亞種(Klebsilla pneumoni aesubsp)、產(chǎn)堿假單胞菌(Pseudomonas alcaligenes)、普通變形桿菌(Proteus vulgaris)、牛莫拉氏菌(Morascella bovis)、遲緩愛(ài)德華氏菌(Edwardsieiia tarda)、單增李斯特菌(Listeria monocytogenes)、金黃色葡萄球菌(

6、Staphylococcus aureus)的抑菌效果，發(fā)現(xiàn)gallic acid特異性抑制哈維氏弧菌、副溶血弧菌、溶藻膠弧菌、鰻弧菌、創(chuàng)傷弧菌，而對(duì)所測(cè)其它弧菌及非弧菌屬不表現(xiàn)活性。采用試管二倍稀釋法測(cè)定了gallic acid對(duì)鰻弧菌(V.anguillarum)CW1的最小抑菌濃度(MIC)，并與常見(jiàn)抗生素卡那霉素(kanamycin)進(jìn)行了比較研究。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，沒(méi)食子酸(gallic acid)對(duì)鰻弧菌(V. anguillaru