基于核酸適配體的赭曲霉素A和伏馬毒素B1檢測方法研究.pdf

1、霉菌毒素是由真菌產(chǎn)生的一種具有毒性的代謝產(chǎn)物。赭曲霉毒素A（OTA）是存在于谷物、飼料等農(nóng)產(chǎn)品中的一種霉菌毒素，而伏馬毒素B1（FB1）是主要存在于玉米及玉米制品中的一種致癌物。因此，霉菌毒素精準檢測技術(shù)的開發(fā)對于保障食品安全至關(guān)重要。為此本文基于特異性核酸適配體建立OTA和FB1的檢測方法。
　　核酸適配體是一種特異性識別靶分子的單鏈寡核苷酸（RNA或 DNA），具有較強的親和力。PicoGreen是一種可以定量檢測雙鏈DNA且

2、不受單鏈DNA影響的熒光染料，在激發(fā)波長480 nm處有最大熒光。為了開發(fā)針對霉菌毒素的快速檢測技術(shù)，本研究利用核酸適配體及PicoGreen染料的特點，建立了一種基于核酸適配體快速檢測赭曲霉毒素A和檢測伏馬毒素B1的方法。
　　結(jié)果表明本研究建立的PicoGreen/適配體方法的最優(yōu)反應(yīng)緩沖體系為：10 mmol/L Tris，120 mmol/L NaCl，5 mmol/L KCl，20 mmol/L CaCl2（pH8.5）

3、。本研究使用的OTA核酸適配體序列為：5'-GATCGGGTGTGGGTGGCGTAAAGGGAGCATCGGACA A-3'。該核酸適配體與 OTA結(jié)合后，未結(jié)合的核酸適配體與互補鏈雜交生成雙鏈DNA，PicoGreen與雙鏈DNA反應(yīng)3 min后激發(fā)產(chǎn)生的熒光達到峰值（激發(fā)波長為480 nm，發(fā)射波長為520 nm）。該方法檢測赭曲霉毒素A的靈敏度為：1μg/L；檢測范圍為：1μg/L?200μg/L。OTA核酸適配體與黃曲霉毒素B

4、1、伏馬毒素、桔毒素和玉米赤霉烯酮等霉菌毒素無交叉反應(yīng)。本方法與基于抗體的ELISA方法符合（Kappa值為：0.885）。
　　本研究利用FB1核酸適配體和PicoGreen建立檢測FB1的方法，最低檢測限為0.1μg/L，線性范圍為0.1μg/L?1μg/L。整個檢測流程可在45min內(nèi)完成。特異性試驗表明，適配體方法特異性強，與靶標霉菌毒素以外的常見霉菌毒素無交叉反應(yīng)。結(jié)果表明適配體方法與商品化的基于抗體的ELISA方法非常