鋅-α2-糖蛋白與原發(fā)性腎小球疾病腎間質(zhì)纖維化及白蛋白誘導(dǎo)NRK-52E細(xì)胞轉(zhuǎn)分化程度的關(guān)系.pdf

1、目的:腎間質(zhì)纖維化在原發(fā)性腎小球疾病的演變和轉(zhuǎn)歸中起重要作用。鋅-α2-糖蛋白是一種多功能糖蛋白，在腎小管上皮細(xì)胞中有表達(dá)。本實(shí)驗(yàn)研究鋅-α2-糖蛋白與原發(fā)性腎小球疾病腎間質(zhì)纖維程度的關(guān)系，以尋求診斷原發(fā)性腎小球疾病腎間質(zhì)纖維化新的生物標(biāo)志物。
　　白蛋白刺激腎小管上皮細(xì)胞可促使其向成纖維細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)分化(EMT)。鋅-α2-糖蛋白在腎小管上皮細(xì)胞中有表達(dá)。本實(shí)驗(yàn)同時(shí)探討鋅-α2-糖蛋白與白蛋白誘導(dǎo)大鼠腎小管上皮細(xì)胞（NRK-52E

2、）轉(zhuǎn)分化程度的關(guān)系，為臨床診斷原發(fā)性腎小球疾病腎間質(zhì)纖維化提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:選取我院臨床診斷為原發(fā)性腎小球疾病行腎穿刺活檢的患者共16例，清晨抽血并收集中斷尿液，收集一般資料（性別、年齡、血肌酐、尿肌酐、胱抑素C、白蛋白、甘油三酯、膽固醇、24小時(shí)尿蛋白），根據(jù)MDRD公式計(jì)算eGFR。收集的血、尿標(biāo)本用ELISA法檢測其鋅α2糖蛋白含量。用Masson染色法對腎臟病理組織進(jìn)行染色，在低倍顯微鏡下觀察腎間質(zhì)纖維化程度

3、。分析血、尿ZAG與上述生化指標(biāo)及腎間質(zhì)纖維化程度的關(guān)系。同時(shí)收集20例健康人的血、尿，檢測上述生化指標(biāo)，分析其與原發(fā)性腎小球疾病患者上述指標(biāo)間是否存在差異性。
　　體外用DMEM/F12培養(yǎng)基培養(yǎng)大鼠腎小管上皮細(xì)胞（NRK-52E），當(dāng)細(xì)胞貼壁生長達(dá)60-70％融合時(shí)，給予不同濃度(0、0.5、1、5、10、30mg/ml)的去脂牛血清白蛋白(d-BSA)刺激NRK-52E細(xì)胞48小時(shí);用同一濃度去脂牛血清白蛋白(d-BSA10

4、mg/ml)刺激NRK-52E細(xì)胞不同時(shí)間（0、2、6、12、24、48小時(shí)）。收集總蛋白，通過Western blot法測定NRK-52E細(xì)胞ZAG及α-SMA蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果:1.原發(fā)性腎小球疾病患者共16例（男/女10/6），健康對照組共20例（男/女12/8）。原發(fā)性腎小球疾病組與健康對照組比較，血液、尿液ZAG、膽固醇明顯升高，有顯著差異性(P＜0.01)。與健康對照組比較，性別、年齡、血尿素氮、血肌酐、甘油三酯

5、均無差異性(P＞0.05);
　　2.16例原發(fā)性腎小球疾病患者血ZAG水平與尿ZAG、胱抑素C、血尿素氮、血肌酐、甘油三酯、膽固醇、eGFR無相關(guān)性(P＞0.05);尿ZAG水平與胱抑素C、血尿素氮、血肌酐、eGFR無相關(guān)性(P＞0.05)。
　　3.16例原發(fā)性腎小球疾病患者腎間質(zhì)纖維化程度按照Banff病理分級結(jié)果:0級（0例）、1級（9例）、2級（7例）、3級（0例）。病理類型主要為:IgA腎?。?例）、輕度系膜增生

6、性腎小球腎炎（5例）、（Ⅱ期）膜性腎?。?例）、增生硬化性腎小球腎炎（1例）、紫癜性腎炎（輕度系膜增生型）（1例）。
　　4.16例原發(fā)性腎小球疾病患者腎間質(zhì)纖維化程度與尿ZAG、血胱抑素C呈正相關(guān)相(P＜0.05)。
　　5.不同濃度d-BSA刺激NRK-52E細(xì)胞48小時(shí)，隨d-BSA濃度增加，ZAG及α-SAM蛋白水平表達(dá)增加。NRK-52E細(xì)胞ZAG的表達(dá)與d-BSA呈濃度依賴性。
　　6.同一濃度(10mg/

7、ml)的d-BSA刺激NRK-52E細(xì)胞不同時(shí)間，在0、2、6、12小時(shí)均無ZAG及α-SMA的表達(dá);在24、48小時(shí)ZAG及α-SMA有表達(dá)，且48小時(shí)ZAG及α-SMA的蛋白表達(dá)水平較24小時(shí)明顯升高。NRK-52E細(xì)胞ZAG的表達(dá)與d-BSA呈時(shí)間依賴性。
　　7.在白蛋白誘導(dǎo)下NRK-52E細(xì)胞ZAG的表達(dá)量隨α-SMA表達(dá)量的增加而增加。
　　結(jié)論:1.原發(fā)性腎小球疾病患者較健康對照組血、尿ZAG均有升高。