β-arrestin-2對(duì)急性哮喘小鼠脾CD4+T細(xì)胞Th1-Th2型細(xì)胞因子分泌的影響及其機(jī)制研究.pdf

1、支氣管哮喘(Asthma)是一種以肥大細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞氣道浸潤(rùn)，以黏液高分泌、氣道高反應(yīng)性和氣道重構(gòu)為特征的慢性氣道炎癥性疾病。關(guān)于氣道炎癥的發(fā)生，以往的研究普遍認(rèn)為主要是免疫源性炎癥，其具體機(jī)制尚有待進(jìn)一步的研究。多數(shù)學(xué)者認(rèn)為輔助性T淋巴細(xì)胞兩種亞型（Th1細(xì)胞和Th2細(xì)胞）的失衡是哮喘發(fā)生的重要機(jī)制，具體則表現(xiàn)為Th2細(xì)胞的活化亢進(jìn)，這是哮喘發(fā)病機(jī)制中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。Th1、Th2細(xì)胞是由共同的前體細(xì)胞，即Th0細(xì)胞分化而

2、來，轉(zhuǎn)錄因子GATA3是Th2細(xì)胞特異性的轉(zhuǎn)錄因子，IFN-γ和IL-4則分別是Th1和Th2類細(xì)胞因子的主要代表。
　　 蛋白質(zhì)是生物體內(nèi)一切功能的執(zhí)行者，故研究疾病必須依賴于分析最終的功能蛋白。所以研究哮喘發(fā)病的功能蛋白對(duì)揭示哮喘的發(fā)病機(jī)制有著不可替代的作用。近年來一種蛋白逐漸進(jìn)入國(guó)外諸多科學(xué)家的視野，并被視為哮喘極具前景的治療靶點(diǎn)—β-arrestin-2。
　　 β-arrestin-2是一種細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白

3、，廣泛參與G蛋白偶聯(lián)受體(G-protein coupled receptors，GPCRs)相關(guān)信號(hào)通路。近年國(guó)外多項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)β-arrestin-2在哮喘發(fā)病中發(fā)揮正向調(diào)節(jié)作用。
　　 β-arrestin-2基因敲除小鼠可能通過抑制T細(xì)胞向肺臟的趨化，抑制哮喘氣道T細(xì)胞的募集以及氣道炎癥和氣道高反應(yīng)性的產(chǎn)生;肺臟基質(zhì)細(xì)胞表達(dá)的β-arrestin-2基因?qū)τ谙瓪獾栏叻磻?yīng)性的形成必不可少;此外，造血干細(xì)胞來源的β-arre

4、stin-2促進(jìn)哮喘氣道炎癥的形成和嗜酸性粒細(xì)胞的因子的趨化。因此，β-arrestin-2是調(diào)節(jié)哮喘發(fā)病的一個(gè)重要因子。
　　 以Th2活化亢進(jìn)為特征的Th1/Th2失衡是哮喘發(fā)病的關(guān)鍵。那么，β-arrestin-2是否也可以影響T細(xì)胞細(xì)胞因子的分泌？β-arrestin-2是一種GPCR調(diào)節(jié)蛋白，多是通過調(diào)節(jié)GPCR發(fā)揮作用。T細(xì)胞表面表達(dá)一定量的β2腎上腺素受體(β2-adrenergic receptor，β2AR)，

5、β2AR是GPCR的家族成員之一。研究發(fā)現(xiàn)T細(xì)胞表面的β2AR調(diào)節(jié)哮喘患者T細(xì)胞細(xì)胞因子的分泌和趨化。而β-arrestin-2可以多途徑調(diào)控β2AR介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)。因此，我們?cè)O(shè)想β-arrestin-2可能通過調(diào)節(jié)β2AR間接影響哮喘小鼠Th1/Th2細(xì)胞型的細(xì)胞因子分泌。
　　 RNA干擾(RNA interference，RNAi)是高度保守的基因沉默技術(shù)，它在功能上與基因敲除或基因沉默一致，但比基因敲除技術(shù)更為方便快捷。

6、在本研究中，我們利用RNA干擾技術(shù)下調(diào)急性哮喘小鼠脾CD4+T細(xì)胞的β-arrestin-2的表達(dá)，以Th1、Th2細(xì)胞特征性的細(xì)胞因子IFN-γ、IL-4和IL-5為評(píng)估的靶點(diǎn)，以急性哮喘小鼠脾CD4+T細(xì)胞表面的β2AR為橋梁，探討急性哮喘小鼠模型脾CD4+T細(xì)胞中β-arrestin-2對(duì)IFN-γ、IL-4和IL-5的影響以及β2AR在此過程中發(fā)揮的作用。研究的主要目的之一是探討β-arrestin-2對(duì)急性哮喘小鼠脾源性CD4