URSA模型小鼠脾CD4+Th17-Treg細胞活化及細胞因子分泌的研究.pdf

1、目的：檢測未妊娠小鼠、正常妊娠模型小鼠及URSA模型小鼠脾臟CD4+Th17/Treg細胞活化水平及 IL-17A、IL-10、IL-21、IL-23細胞因子分泌的變化。探討CD4+Th17/Treg細胞及相關細胞因子與URSA的關系，為URSA患者制定免疫防治策略提供基礎資料。
　　方法：建立URSA小鼠模型（♀CBA/J×♂DBA/2J），實驗設未妊娠小鼠（♀CBA/J）和正常妊娠小鼠模型（♀CBA/J×♂Balb/c）；用免

2、疫磁珠分選技術（MACS）將三組雌鼠脾臟中的CD4+T細胞分選出來，將分選的CD4+T細胞體外誘導活化為Th17/Treg兩個細胞體系，流式細胞術（FCM）檢測兩個細胞體系的誘導活化情況；通過Luminex xMAP技術檢測誘導活化后的細胞培養(yǎng)上清液及蛻膜、胎盤細胞研磨上清中IL-17A、IL-10、IL-21、IL-23的分泌水平。用Western-Blot檢測Th17/Treg兩細胞體系及母-胎界面的蛻膜、胎盤細胞中IDO、FoxP

3、3蛋白的表達水平。
　　結果：（1）FCM檢測未妊娠小鼠、正常妊娠模型小鼠和URSA模型小鼠脾臟中CD4+T細胞來源的Th17細胞的誘導結果分別為（0.32±0.19）％、（0.13±0.06）%、（0.72±0.38）%。URSA組Th17細胞明顯高于未妊娠組和正常妊娠組。三組間兩兩比較差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。三組CD4+CD25+FoxP3+Treg細胞的誘導結果分別為（0.38±0.15）%、（0.85±0.48

4、）%、（0.17±0.12）%。URSA組CD4+CD25+FoxP3+Treg細胞明顯低于未妊娠組和正常妊娠組。三組間兩兩比較差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　（2）Luminex xMAP技術檢測小鼠母-胎界面的蛻膜、胎盤細胞研磨上清中的細胞因子分泌水平：正常妊娠組IL-17A（9.90±5.04）pg/ml、IL-10（6.50±7.03）pg/ml、IL-23（14.84±11.41）pg/ml和URSA組IL-1

5、7A（14.00±16.73）pg/ml、IL-10（4.10±6.25） pg/ml、IL-23（17.52±16.15）pg/ml。而IL-21細胞因子分泌水平濃度低于檢測下限（P>0.05）。三組小鼠誘導后的Th17/Treg細胞上清中的IL-17A、IL-10、IL-21、IL-23細胞因子分泌水平的濃度均低于檢測下限。
　　（3）Western Blot檢測未妊娠小鼠、正常妊娠模型小鼠和URSA模型小鼠脾臟來源的CD4+

6、T細胞誘導后的Th17/Treg細胞中IDO、FoxP3結果：URSA組IDO、FoxP3的表達均明顯低于未妊娠組和正常妊娠組。三組間兩兩比較差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。URSA組小鼠研磨的蛻膜、胎盤細胞中IDO、FoxP3蛋白表達均顯著低于正常妊娠組。兩組之間比較差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　結論：（1）URSA小鼠Th17細胞的活化分化增殖與URSA的發(fā)生相關，即Th17細胞數(shù)量上升不利于妊娠維持；正常妊娠

7、表現(xiàn)為CD4+CD25+FoxP3+Treg細胞偏移現(xiàn)象，在URSA時CD4+CD25+FoxP3+Treg細胞數(shù)量降低則不足以維持妊娠。
　?。?）URSA小鼠脾CD4+T細胞活化后分泌IL-17A和IL-23與URSA的發(fā)病有關，且兩者的增加可能誘使URSA發(fā)生；IL-10分泌升高則可維持正常的妊娠。
　?。?）URSA小鼠的蛻膜、胎盤細胞中IDO、FoxP3蛋白表達較正常妊娠組均顯著降低，監(jiān)測URSA患者再孕時早孕期的