內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)因子Hrd1在糖尿病鼠視網(wǎng)膜的表達(dá)變化.pdf

1、目的：內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在糖尿病視網(wǎng)膜病的發(fā)生和發(fā)展中起到重要作用,而羥甲基戊二酰輔酶A 還原酶降解蛋白1（Hrd1）能通過(guò)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相關(guān)蛋白降解途徑穩(wěn)定內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)環(huán)境從而減少內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的發(fā)生。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)基因芯片分析內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相關(guān)因子的變化，并觀察Hrd1在糖尿病鼠視網(wǎng)膜和體外高糖培養(yǎng)人視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞的表達(dá)變化，分析它在糖尿病視網(wǎng)膜病變發(fā)生和發(fā)展中的作用。
　　 方法：腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)（65mg/kg）制作糖尿病SD 大鼠模型，

2、對(duì)照組大鼠腹腔注射同等劑量檸檬酸鈉溶液。于注射后72 小時(shí)用鼠尾采血法測(cè)量血糖，7天后以血糖值≥16.7mmol/L 認(rèn)定為Ⅰ型糖尿病鼠建模成立，以后每周監(jiān)測(cè)血糖一次。模型成立三個(gè)月時(shí)取大鼠視網(wǎng)膜組織。用自行設(shè)計(jì)實(shí)時(shí)定量PCR芯片分析89個(gè)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相關(guān)因子的表達(dá)變化。用Western blot、免疫熒光檢測(cè)Hrd1在三月糖尿病模型鼠和對(duì)照組大鼠視網(wǎng)膜中的表達(dá)。對(duì)體外培養(yǎng)人視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞，用高糖培養(yǎng)基干預(yù)48小時(shí)后，用免疫熒光檢測(cè)Hr

3、d1在細(xì)胞的表達(dá)變化。
　　 結(jié)果：在視網(wǎng)膜組織中：PCR芯片結(jié)果顯示，在這89個(gè)基因中，三個(gè)月糖尿病模型組有12個(gè)基因Mrna水平發(fā)生了變化，其中Hrd1表達(dá)下降，與正常對(duì)照組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；Western blot 顯示，三個(gè)月糖尿病模型組Hrd1 蛋白質(zhì)表達(dá)水平與對(duì)照組相比下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；免疫熒光顯示，F(xiàn)ITC 標(biāo)記的Hrd1在糖尿病鼠視網(wǎng)膜中綠色熒光減弱，表明其蛋白質(zhì)表達(dá)下