糞菌移植對仔豬生產(chǎn)性能、腸道菌群和腸粘膜發(fā)育的影響.pdf

1、近年來研究發(fā)現(xiàn)腸道菌群與機(jī)體健康、代謝性疾病、腸道疾病等密切相關(guān)，菌群紊亂可造成多種疾病，運(yùn)用糞菌移植可治療人類潰瘍性結(jié)腸炎、腸易激綜合征、克羅恩病等腸道疾病。本課題選取金華豬糞菌液為試驗材料，以新生仔豬為試驗對象，研究糞菌移植對仔豬生長性能、腸道菌群和腸粘膜發(fā)育的影響，運(yùn)用16S rDNA高通量測序方法分析腸道菌群結(jié)構(gòu)和多樣性，采用免疫組化和Western blot技術(shù)檢測腸粘膜SIgA+細(xì)胞、TLR、杯狀細(xì)胞、MUC2和緊密連接蛋白

2、的變化，探討糞菌移植對仔豬腸道健康的影響，旨在為豬生產(chǎn)中腸道相關(guān)疾病的治療與預(yù)防提供新的思路。
　　根據(jù)胎次相近原則，選取12窩杜×長×大三元雜交新生仔豬，隨機(jī)分為2組（每組6窩）。試驗組仔豬出生后1-12d隔天灌服1.5ml金華豬糞便菌懸液，對照組灌服等量無菌生理鹽水，試驗期42d。分別于12d、27d(斷奶前一天)從對照組和試驗組中隨機(jī)選取6頭，共24頭進(jìn)行屠宰試驗，采集血清、腸粘膜和腸道內(nèi)容物等樣品進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)檢測。主要結(jié)果

3、如下:
　　1.生產(chǎn)性能
　　1-12d試驗組日增重與對照組相比無顯著差異(P＞0.05)，13-27d試驗組日增重有增高趨勢(P＞0.05)，28-42d試驗組日增重顯著高于對照組(P＜0.05)。0-27d試驗組腹瀉率顯著低于對照組(P＜0.05)，28-42d試驗組腹瀉率有明顯降低趨勢(P＞0.05)，并遲于對照組出現(xiàn)腹瀉，且持續(xù)時間短。
　　2.腸道菌群結(jié)構(gòu)
　　菌群α多樣性、β多樣性和樣本聚類等分析結(jié)果

4、如下:
　　α多樣性:試驗組菌群豐度和多樣性比對照組有增高趨勢(P＞0.05)。UPGMA聚類分析發(fā)現(xiàn)，12d試驗組與對照組同源性相近，且試驗組與金華豬的同源性大于對照組。
　　繪制韋恩圖(Venn Graph)分析不同組之間的OTUs共有、特有信息，發(fā)現(xiàn)12d和27d試驗組與金華豬共有OTU數(shù)量大于對照組，且試驗組不同日齡OTU數(shù)量大于對照組。
　　門水平:所有豬腸道菌群以厚壁菌門、擬桿菌門、變形菌門、梭桿菌門、無壁

5、菌門為主，其中厚壁菌門和擬桿菌門占89％-98％，是腸道中絕對優(yōu)勢菌。與對照組相比，試驗組各日齡厚壁菌門顯著提高(P＜0.05)，無壁菌門有增高趨勢(P＞0.05)，擬桿菌門有降低趨勢(P＞0.05)，27d變形菌門顯著降低(P＜0.05)。
　　科水平:與對照組相比，12d和27d試驗組普雷沃斯菌科、Paraprevotellaceae顯著升高(P＜0.05)，S24-7、理研菌科、巴斯德世菌科、Odoribacteraceae

6、顯著降低(P＜0.05);27d和42d試驗組毛螺菌科顯著升高(P＜0.05);試驗組各日齡乳桿菌科有增高趨勢(P＞0.05)，擬桿菌科和韋榮球菌科顯著低于對照組(P＜0.05);27d對照組腸桿菌科、梭桿菌科、梭菌科、巴斯德世菌科、Alcaligenaceae、Peptostrptococcaceae、琥珀酸弧菌科顯著高于試驗組(P＜0.05)。
　　屬水平:試驗組各日齡顫螺菌屬顯著高于對照組(P＜0.05)，擬桿菌屬顯著低于對

7、照組(P＜0.05);12d和27d試驗組普氏菌屬和CF231顯著高于對照組(P＜0.05);27和42d試驗組羅氏菌屬、瘤胃球菌屬顯著高于對照組(P＜0.05);27d對照組j2-29、薩特氏菌屬、埃希式桿菌屬顯著高于試驗組(P＜0.05)。
　　3.腸道粘膜發(fā)育相關(guān)指標(biāo)
　　掃描電鏡觀察發(fā)現(xiàn)，試驗組空腸絨毛排列整齊，呈長指狀，對照組空腸絨毛存在破損現(xiàn)象。與對照組相比，12d試驗組回腸絨毛高度與隱窩深度比值顯著提高(P＜0

8、.05);27d試驗組十二指腸、空腸和回腸隱窩深度均顯著下降(P＜0.05)，其中空腸和回腸絨毛高度/隱窩深度比值顯著提高(P＜0.05)，各日齡小腸絨毛高度未見明顯變化(P＞0.05)。
　　與對照組相比，12d和27d試驗組回腸、結(jié)腸杯狀細(xì)胞數(shù)量均顯著提高(P＜0.05)，12d試驗組回腸、結(jié)腸及27d試驗組結(jié)腸MUC2mRNA和蛋白表達(dá)均顯著提高(P＜0.05);12d試驗組回腸和結(jié)腸ZO-1和Occludin蛋白表達(dá)均顯著

9、升高(P＜0.05);12d結(jié)腸粘膜TLR2、TLR4mRNA表達(dá)顯著提高(P＜0.05)，27d結(jié)腸粘膜TLR2、TLR4mRNA表達(dá)無明顯變化(P＞0.05);12d試驗組結(jié)腸SIgA+細(xì)胞數(shù)量顯著增多(P＜0.05)。
　　4.血清抗氧化和生化指標(biāo)
　　與對照組相比，12d試驗組血清總抗氧化能力T-AOC顯著提高(P＜0.05)，血清丙二醛含量明顯降低(P＜0.05);血清超氧化物歧化酶SOD和谷胱甘肽過氧化物岐化酶G

10、SH-Px活性無顯著變化(P＞0.05);12d和27d血清谷草轉(zhuǎn)氨酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶和血清堿性磷酸酶活性和總蛋白、尿素氮含量無顯著變化(P＞0.05)。
　　上述結(jié)果提示:(1)糞菌移植能降低仔豬腹瀉率，改善仔豬生長狀況。(2)糞菌移植主要影響厚壁菌門、擬桿菌門和變形菌門進(jìn)而改變腸道菌群結(jié)構(gòu)。(3)糞菌移植可降低小腸隱窩深度，提高絨毛高度/隱窩深度比值，提高回腸和結(jié)腸杯狀細(xì)胞和SIgA+細(xì)胞數(shù)量、MUC2和緊密連接蛋白表達(dá)及結(jié)腸TL