小鼠巨噬細胞吞噬凋亡細胞的炎癥調(diào)節(jié)及性別差異.pdf

1、目的:炎癥恢復(fù)涉及浸潤免疫細胞的凋亡和消除,炎癥介質(zhì)對其具有調(diào)節(jié)作用,其機理有待深入研究；目前對吞噬機理的認識主要基于體外研究,建立一種方便、準確評價體內(nèi)巨噬細胞吞噬能力的新方法有助于研究生理狀態(tài)下細胞的吞噬；有證據(jù)表明凋亡細胞清除缺陷與多種自身免疫性疾病相關(guān),而與吞噬缺陷相關(guān)的自身免疫性疾病在女性中的發(fā)病率遠高于男性,不同性別中巨噬細胞吞噬凋亡細胞的能力尚無研究。
　　 材料與方法:小鼠中性粒細胞37℃培養(yǎng)24 h使其自然凋亡

2、,小鼠胸腺細胞用地塞米松(DEX)誘導(dǎo)凋亡,凋亡細胞用Anx-V標記鑒定；分離小鼠腹腔巨噬細胞,用其標志物(F4/80)的抗體鑒定。體外巨噬細胞與凋亡細胞共培養(yǎng)評價吞噬能力；體內(nèi)實驗,將凋亡細胞注射入小鼠腹腔,顯微鏡下觀察或流式細胞儀分析巨噬細胞對凋亡細胞的吞噬率。定量RT-PCR(Q-PCR)分析基因表達的mRNA,ELISA檢測細胞因子的水平。
　　 結(jié)果:發(fā)現(xiàn)炎癥誘導(dǎo)劑細菌脂多糖(LPS)特異性抑制巨噬細胞吞噬凋亡細胞,L

3、PS可誘導(dǎo)產(chǎn)生TNF-α,但抑制Gas6的表達。TNF-α的中和抗體以及外源性Gas6可以阻斷LPS的吞噬抑制能力。表明LPS通過誘導(dǎo)TNF-α以及Gas6表達抑制巨噬細胞吞噬能力。而且發(fā)現(xiàn)LPS抑制Gas6的表達不依賴于TLR4受體。
　　 建立了體內(nèi)評價吞噬能力的新方法:凋亡細胞用FITC標記,注射入小鼠腹腔,1 h后用PE標記的F4/80抗體鑒定巨噬細胞,臺盼藍淬滅粘附凋亡細胞的熒光。F4/80+/FITC+雙陽性細胞為吞

4、噬了凋亡細胞的巨噬細胞。利用這一方法證實在體內(nèi)LPS可以抑制巨噬細胞吞噬凋亡細胞的能力。
　　 不同性別小鼠巨噬細胞吞噬凋亡細胞的能力存在差異,與鼠齡相關(guān)。在青春期(2—6月齡)和中年(12—18月齡)鼠中,雄性鼠巨噬細胞吞噬凋亡細胞的能力高于雌鼠；而未成年組(小于1月齡)和老年組(大于24月齡)則相反。相同性別中成年及中年小鼠巨噬細胞吞噬能力高于未成年組和老年組。而且激素水平不能顯著影響巨噬細胞的吞噬能力。
　　 結(jié)論