小鼠巨噬細(xì)胞吞噬凋亡細(xì)胞的炎癥調(diào)節(jié)及性別差異.pdf

1、目的:炎癥恢復(fù)涉及浸潤免疫細(xì)胞的凋亡和消除,炎癥介質(zhì)對其具有調(diào)節(jié)作用,其機(jī)理有待深入研究；目前對吞噬機(jī)理的認(rèn)識(shí)主要基于體外研究,建立一種方便、準(zhǔn)確評價(jià)體內(nèi)巨噬細(xì)胞吞噬能力的新方法有助于研究生理狀態(tài)下細(xì)胞的吞噬；有證據(jù)表明凋亡細(xì)胞清除缺陷與多種自身免疫性疾病相關(guān),而與吞噬缺陷相關(guān)的自身免疫性疾病在女性中的發(fā)病率遠(yuǎn)高于男性,不同性別中巨噬細(xì)胞吞噬凋亡細(xì)胞的能力尚無研究。
　　 材料與方法:小鼠中性粒細(xì)胞37℃培養(yǎng)24 h使其自然凋亡

2、,小鼠胸腺細(xì)胞用地塞米松(DEX)誘導(dǎo)凋亡,凋亡細(xì)胞用Anx-V標(biāo)記鑒定；分離小鼠腹腔巨噬細(xì)胞,用其標(biāo)志物(F4/80)的抗體鑒定。體外巨噬細(xì)胞與凋亡細(xì)胞共培養(yǎng)評價(jià)吞噬能力；體內(nèi)實(shí)驗(yàn),將凋亡細(xì)胞注射入小鼠腹腔,顯微鏡下觀察或流式細(xì)胞儀分析巨噬細(xì)胞對凋亡細(xì)胞的吞噬率。定量RT-PCR(Q-PCR)分析基因表達(dá)的mRNA,ELISA檢測細(xì)胞因子的水平。
　　 結(jié)果:發(fā)現(xiàn)炎癥誘導(dǎo)劑細(xì)菌脂多糖(LPS)特異性抑制巨噬細(xì)胞吞噬凋亡細(xì)胞,L

3、PS可誘導(dǎo)產(chǎn)生TNF-α,但抑制Gas6的表達(dá)。TNF-α的中和抗體以及外源性Gas6可以阻斷LPS的吞噬抑制能力。表明LPS通過誘導(dǎo)TNF-α以及Gas6表達(dá)抑制巨噬細(xì)胞吞噬能力。而且發(fā)現(xiàn)LPS抑制Gas6的表達(dá)不依賴于TLR4受體。
　　 建立了體內(nèi)評價(jià)吞噬能力的新方法:凋亡細(xì)胞用FITC標(biāo)記,注射入小鼠腹腔,1 h后用PE標(biāo)記的F4/80抗體鑒定巨噬細(xì)胞,臺(tái)盼藍(lán)淬滅粘附凋亡細(xì)胞的熒光。F4/80+/FITC+雙陽性細(xì)胞為吞

4、噬了凋亡細(xì)胞的巨噬細(xì)胞。利用這一方法證實(shí)在體內(nèi)LPS可以抑制巨噬細(xì)胞吞噬凋亡細(xì)胞的能力。
　　 不同性別小鼠巨噬細(xì)胞吞噬凋亡細(xì)胞的能力存在差異,與鼠齡相關(guān)。在青春期(2—6月齡)和中年(12—18月齡)鼠中,雄性鼠巨噬細(xì)胞吞噬凋亡細(xì)胞的能力高于雌鼠；而未成年組(小于1月齡)和老年組(大于24月齡)則相反。相同性別中成年及中年小鼠巨噬細(xì)胞吞噬能力高于未成年組和老年組。而且激素水平不能顯著影響巨噬細(xì)胞的吞噬能力。
　　 結(jié)論